[发明专利]一种星油藤脱毒苗的培养方法

说明书

本发明公开了一种星油藤脱毒苗的培养方法，星油藤又称为南美油藤、印加果和印加花生等，从星油藤种子榨取的油脂富含含α‑亚麻酸、α‑亚油酸和油酸等多元不饱和脂肪，药品和化妆品等领域。星油藤为多年生藤本植物，一次种植后可连续收果多年，但由于星油藤幼苗自身携带病毒，后期植株病害严重，导致落果，产果量下降。因此，本发明以星油藤植株茎尖为外植体，经过不定芽诱导、脱毒处理、增殖培养、生根培养和炼苗移栽等过程获得大批量的星油藤脱毒苗，有效降低了大田种植后期的发病率，提高了星油藤产果量。

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体地说，公开了一种星油藤脱毒苗的培养方法。

背景技术

星油藤(Plukenetia volubilis L.)又称为南美油藤、印加果和印加花生等，从星油藤种子榨取的油脂富含含α-亚麻酸、α-亚油酸和油酸等多元不饱和脂肪，药品和化妆品等领。星油藤于2006年被引进中国科学院西双版纳热带植物园培育种植并获得成功，目前云南、贵州等省市大力发展星油藤产业。星油藤为多年生藤本植物，一次种植后可连续收果多年，但由于星油藤幼苗自身携带病毒，后期植株病害严重，导致落果，产果量下降。因此，建立一种有效的百香果脱毒苗培养方法对于星油藤产业的发展具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种星油藤脱毒苗的培养方法，本发明以星油藤植株茎尖为外植体，经过不定芽诱导、脱毒处理、增殖培养、生根培养和炼苗移栽等过程获得大批量的星油藤脱毒苗，有效降低了大田种植后期的发病率，提高了星油藤产果量，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种星油藤脱毒苗的培养方法，包括以下的工艺步骤：

(1)不定芽诱导：选取星油藤植株6～8cm茎尖为外植体，经75％乙醇消毒10s，用无菌水洗涤5次后，置于0.1％升汞溶液中浸泡6min，再用无菌水洗涤6次，经无菌滤纸吸干水珠后切成2～3cm的带节茎段，接种到不定芽诱导培养中，于25℃条件下黑暗培养至形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基为MS+0.1～0.5mg/L TDZ+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

(2)脱毒处理：在无菌条件下，用灭菌的不含琼脂的不定芽诱导培养基中浸泡无菌滤纸10～20min，并将其平铺于无菌培养瓶中，再将步骤(1)获得的不定芽紧贴滤纸上，置于40～45℃条件下黑暗培养3～5d，剥取新生不定芽0.5cm的茎尖，并接种于不定芽诱导培养基中，于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养20～30d形成新的不定芽。再用灭菌的不含琼脂的不定芽诱导培养基中浸泡无菌滤纸10～20min，并将其平铺于无菌培养瓶中，再将新形成的不定芽紧贴滤纸上，置于40～45℃条件下黑暗培养3～5d，剥取新生不定芽0.2cm的茎尖，并接种于不定芽诱导培养基中，于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养20～30d形成新的不定芽。

(3)增殖培养：将步骤(2)获得的不定芽从基部切下并接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照12～15h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25℃条件下培养，每20～30d转接一次。所述的增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

(4)生根培养：将步骤(3)获得的长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下黑暗培养3～5d，然后置于每天光照12～15h，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25℃条件下培养至生根。所述的生根培养基为1/2MS+0.1～0.5mg/L IBA+1.0～2.0mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；