[发明专利]共价有机网络材料原位包埋固定化酶的制备方法在审
| 申请号： | 202210282419.5 | 申请日： | 2022-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN114854730A | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 石家福;吴振华;焦彧帅;张佳旭 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N11/082 | 分类号： | C12N11/082;C12N9/04 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 李丽萍 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 共价 有机 网络 材料 原位 包埋 固定 制备 方法 | ||
1.一种共价有机网络材料原位包埋固定化酶的制备方法，其特征在于，基于一锅法共沉淀策略，以酶诱导醛基与氨基间的席夫碱反应对酶进行原位固定化制备了酶/共价有机网络材料，在酶表面形成共价有机网络材料多孔性保护涂层，实现了原位制备共价有机网络材料固定化酶颗粒及高效负载酶分子。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、室温下，在磁力搅拌下分别将三醛基间苯三酚与联苯胺均以2:3的摩尔比分别分散于等体积的乙醇溶液中，充分搅拌，获得三醛基间苯三酚/乙醇分散液和联苯胺/乙醇分散液；
步骤二、将三醛基间苯三酚/乙醇分散液和联苯胺/乙醇分散液混合，然后以1:10的体积比向该混合溶液中加入2.5-7.5mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮修饰的葡萄糖氧化酶溶液，继续搅拌30min，将得到的悬浊液离心，以PBS缓冲液洗涤3次，冻干12个小时所得颗粒即为共价有机网络材料原位包埋固定化酶，简称为GOx@TpBD。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中，磁力搅拌的转速为400-1000rpm；后续充分搅拌的时间为15-35min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，浓度为2.5-7.5mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮修饰的葡萄糖氧化酶溶液的制备方法是：以浓度为100mM，pH＝7.0的PBS缓冲液为溶剂制备一定浓度的葡萄糖氧化酶溶液，将该葡萄糖氧化酶溶液与一定体积的聚乙烯吡咯烷酮溶液等体积混合，摇床孵化反应15min，即为所得，简称为PVP/GOx溶液。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，将三醛基间苯三酚/乙醇分散液和联苯胺/乙醇分散液混合是以800rpm的转速搅拌30min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，悬浊液离心的转速为10000rpm，时间为5min。
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