[发明专利]一种几丁质酶Chi6115及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种表达几丁质酶Chi6115的基因序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种重组载体，其含有权利要求1所述的一种表达几丁质酶Chi6115的基因序列。

3.一种重组菌，其含有权利要求2所述的重组载体。

4.一种几丁质酶Chi6115，其特征在于：其蛋白序列如SEQ ID NO:2 所示。

5.如权利要求4所述的几丁质酶Chi6115的用途，其用于几丁质资源的开发利用。

6.如权利要求4所述的几丁质酶Chi6115的用途，用于几丁寡糖的制备。

7.几丁质酶Chi6115的制备方法，包括如下步骤：

（1）合成如序列为SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列；

（2）重组质粒的构建

在人工合成几丁质酶chi6115基因序列的5’和3’端分别引入BamHI和XhoI两个酶切位点，带有BamHI和XhoI酶切位点的几丁质酶chi6115基因的DNA片段经限制性内切酶BamHI和XhoI酶切后，被连接到经同样限制性内切酶酶切的表达载体pET-28a(+)上，将连接产物转化大肠杆菌Escherichia coli TOP10受体菌株，筛选含有几丁质酶chi6115基因的重组质粒，并进行双酶切和测序验证；

（3）几丁质酶Chi6115的表达与纯化

将含有几丁质酶chi6115基因的重组质粒转化入大肠杆菌E. coli BL21受体菌株，诱导几丁质酶Chi6115蛋白表达，再纯化重组蛋白。

8.如权利要求7所述的几丁质酶Chi6115的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，用IPTG诱导几丁质酶Chi6115蛋白表达。

9.如权利要求7所述的几丁质酶Chi6115的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，采用Ni-Sepharose亲和层析纯化重组蛋白。