[发明专利]一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及其应用

说明书

本发明提供一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及其应用。为了克服现有细胞实验无法重现肺气血屏障基质结构，无法在组织层面上、蛋白水平上、基因水平上以及超微结构上反应肺气血屏障在损伤或修复过程及机制，以及无法重现肺气血屏障损伤及修复过程等缺陷，本申请提出将精准肺切片置于含有脂多糖的培养基的培养模具中培养建立得肺气血屏障损伤模型。通过该模型不仅能够实时动态观察肺气血屏障损伤及修复过程，还可将其用于探究肺气血屏障损伤后药物修复机制、用于开发或筛选用于修复肺气血屏障损伤的药物，并可为用于修复肺气血屏障损伤的药物提供一种更准确的评价方法。

技术领域

本发明属于医学用模型技术领域，具体涉及一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及其应用。

背景技术

急性胰腺炎肺损伤(acute pancreatitis-associated lung injury,APALI)是重症急性胰腺炎最常见且最严重的早期并发症，其发病机制复杂，治疗棘手，目前尚无有效治疗手段。APALI发生及发展的最重要原因之一是失控的全身炎症反应诱发了肺气血屏障的破坏，而如何重建肺气血屏障是当前亟待解决的难题。

肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells，AEC)及肺微血管内皮细胞(Pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC)的结构和功能是肺气血屏障功能的重要组成部分。前期研究及既往文献报道均表明了急性胰腺炎肺损伤发生时肺泡上皮细胞和肺微血管内皮细胞的完整性遭到了严重的破坏，因此现有技术多采用2D或3D细胞培养方式，通过观察肺泡上皮细胞和/或肺微血管内皮细胞变化评价急性胰腺炎肺损伤修复药物，而由于细胞实验不能重现肺气血屏障在损伤及修复过程中的基质结构变化，无法真实、全面的反应肺气血屏障在损伤及修复过程中状态，因此不适合作为探究肺气血屏障损伤或修复的具体机制或研究药物对肺气血屏障的影响的实验模型。

发明内容

本发明的目的是提供一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及应用。

本发明的另一目的是提供一种用于修复肺气血屏障损伤的药物的评价方法。

本发明的再一目的是提供一种用于建立肺气血屏障损伤模型的培养模具。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种肺气血屏障损伤模型的建立方法，将精准肺切片置于含有脂多糖(LPS)的培养基的培养模具中培养建立得所述的肺气血屏障损伤模型。

精准肺切片(precision-cut lung slices，PCLS)相比单细胞培养或双细胞共培养能够保存相对完整且有活性的肺泡和毛细血管结构，拥有较完整的细胞和细胞间以及细胞与基质间的紧密连接结构。使用精准肺切片构建接近生理条件下肺气血屏障损伤的模型，可以重现肺气血屏障损伤及修复过程，能够更好地在组织层面上、蛋白水平上、基因水平上以及超微结构上反应肺气血屏障在损伤或修复过程及机制。

优选地，向所述的培养模具中连续地通入所述的含有脂多糖的培养基并使所述的含有脂多糖的培养基连续地从所述的培养模具中流出，以使所述的培养模具中所述的含有脂多糖的培养基的量保持恒定。采用连续培养方式能够有效缩短培养周期。

优选地，所述的脂多糖的终浓度为80～120ng/mL。例如80ng/mL、85ng/mL、90ng/mL、95ng/mL、100ng/mL、105ng/mL、110ng/mL、115ng/mL、120ng/mL。

优选地，所述的培养模具中的培养环境为5％CO₂，35～38℃，同时所述的培养环境还需保持无菌条件，保证精准肺切片中细胞的活性。