[发明专利]生物保存液及其在卵母细胞和卵巢组织保存中的应用

权利要求书

1.一种生物保存液，由平衡液、玻璃化液和N种解冻液组成，其特征在于，N为不小于2的正整数；

所述平衡液、所述玻璃化液和每种解冻液均包含组成和含量相同的基准液；

所述平衡液和所述玻璃化液还含渗透性冷冻保护剂和非渗透冷冻保护剂，所述解冻液还包含非渗透性冷冻保护剂；

所述玻璃化液中的非渗透冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的非渗透性冷冻保护剂的含量；

所述玻璃化液中的渗透性冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量；

不同解冻液中的非渗透性冷冻保护剂的含量不同，随所述N次复苏过程逐步降低。

2.根据权利要求1所述的生物保存液，其特征在于，所述玻璃化液中的非渗透冷冻保护剂的含量是所述平衡液中的非渗透性冷冻保护剂的含量的8-30倍。

3.根据权利要求2所述的生物保存液，其特征在于，所述平衡液中的非渗透冷冻保护剂含有5-40mg/ml的人血白蛋白。

4.根据权利要求3所述的生物保存液，其特征在于，所述玻璃化液的非渗透冷冻保护剂具有与所述平衡液中相同含量的人血白蛋白，还含有0.1-2mol/L的蔗糖和海藻糖的任意一种。

5.根据权利要求1所述的生物保存液，其特征在于，所述玻璃化液中的渗透性冷冻保护剂的含量是所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量的0.8-1.5倍。

6.根据权利要求5所述的生物保存液，其特征在于，所述平衡液和所述玻璃化液中的任意一种的渗透性冷冻保护剂由体积百分比为2-30％的乙二醇和二甲基亚砜组成，所述玻璃化液的乙二醇含量高于所述平衡液的乙二醇含量，所述玻璃化液的二甲基亚砜含量高于所述平衡液的二甲基亚砜含量。

7.根据权利要求6所述的生物保存液，其特征在于，同一平衡液和同一玻璃化液的任意一种的乙二醇和二甲基亚砜具有相同的含量。

8.根据权利要求1所述的生物保存液，其特征在于，不同解冻液中的非渗透性冷冻保护剂含量随所述复苏过程逐步降低0.2-1倍。

9.根据权利要求8所述的生物保存液，其特征在于，以每种解冻液的体积计，不同解冻液的非渗透性冷冻保护剂均具有含量为5-40mg/ml的人血白蛋白，不同解冻液具有相同含量的人血白蛋白。

10.根据权利要求9所述的生物保存液，其特征在于，以每种解冻液的体积计，不同解冻液的非渗透性冷冻保护剂均具有含量为0.05-3mol/L的蔗糖和海藻糖的任意一种，不同解冻液的蔗糖和海藻糖中任意一种的含量随所述N次复苏过程逐步降低。

11.根据权利要求1所述的生物保存液，其特征在于，所述基准液含有0.1-10mmol/L的抗氧化剂。

12.根据权利要求11所述的生物保存液，其特征在于，所述基准液还具有营养剂、能量物质、缓冲剂、抗菌剂以及pH调节剂。

13.如权利要求1-12任一项所述的生物保存液应用于卵母细胞冻存和复苏过程，其特征在于，控制所述平衡液和所述玻璃化液的温度为10-25摄氏度，控制第一种解冻液的温度为30-40摄氏度，其余解冻液的温度为10-25摄氏度。

14.根据权利要求13所述的应用于卵母细胞冻存和复苏过程，其特征在于，控制使用所述平衡液进行样本处理的时间不超过10分钟，使用所述玻璃化液进行样本处理的时间不超过5分钟，使用所述第一种解冻液进行复苏的时间不超过3分钟，使用所述其余解冻液分别进行复苏的时间不超过10分钟。

15.根据权利要求13所述的应用于卵母细胞冻存和复苏过程，其特征在于，使用平衡液和玻璃化液进行样本处理的次数均至少为2。