[发明专利]生物保存液及其在卵母细胞和卵巢组织保存中的应用

说明书

本发明提供了一种生物保存液，由平衡液、玻璃化液和N种解冻液组成，N为不小于2的正整数。本发明的所述生物保存液通过控制所述玻璃化液中的非渗透冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的非渗透性冷冻保护剂的含量；所述玻璃化液中的渗透性冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量；不同解冻液中的非渗透性冷冻保护剂的含量不同，随所述N次复苏过程逐步降低。所述生物保存液有利于提供卵母细胞和卵巢组织生存的微环境，提高细胞和组织的冻存复苏后活率，保存生物活性和功能。本发明还提供了所述生物保存液在卵母细胞和卵巢组织冷冻保存和复苏过程中的应用。

技术领域

本发明涉及生物保存技术领域，尤其涉及生物保存液及其在卵母细胞和卵巢组织冻存和复苏中的应用。

背景技术

卵母细胞和卵巢组织冻存技术是保存女性生育力的最有潜力和最受关注的技术。在冻存和复苏过程中，维持卵母细胞和卵巢组织存活的微环境，保存组织的活性和功能是最难攻克的瓶颈。

理想的用于卵母细胞和卵巢组织保存的冻存复苏溶液要能够保存卵母细胞和卵巢组织活性与功能。目前，虽然开发出了多种冷冻保存和复苏液，但只可应用于卵母细胞的冻存与复苏，或应用于卵巢组织的冻存与复苏。目前，没有同时适用于卵母细胞和卵巢组织的冷冻液和复苏液。

因此，有必要提供一种新型的生物保存液既可用于卵母细胞冻存与复苏又可用于卵巢组织的冻存与复苏，以解决现有技术中存在的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物保存液及其在卵母细胞和卵巢组织保存中的应用，以利于延长细胞与组织的保存时间，提高卵母细胞和卵巢组织冻存复苏后的活率，保存细胞和组织的功能。

为实现上述目的，本发明的所述生物保存液，由平衡液、玻璃化液和N种解冻液组成，以应用于对生物样本进行冻存和复苏过程；

所述平衡液、所述玻璃化液和每种解冻液均包含组成和含量相同的基准液；

所述平衡液和所述玻璃化液含有渗透性冷冻保护剂和非渗透冷冻保护剂，所述解冻液含有非渗透性冷冻保护剂；

所述玻璃化液中的非渗透冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的非渗透性冷冻保护剂的含量；

所述玻璃化液中的渗透性冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量；

不同解冻液中的非渗透性冷冻保护剂的含量随所述复苏过程逐步降低。

本发明的所述生物保存液的有益效果在于：通过控制所述玻璃化液中的非渗透冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的非渗透性冷冻保护剂的含量；所述玻璃化液中的渗透性冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量；不同解冻液中的非渗透性冷冻保护剂的含量不同，随复苏过程的逐步降低，有利于提高卵母细胞和卵巢组织冻存和复苏后的生物活性，维持卵母细胞和卵巢组织的功能。

优选的，所述玻璃化液中非渗透冷冻保护剂的含量是所述平衡液中非渗透性冷冻保护剂含量的8-30倍。

进一步优选的，所述平衡液中非渗透冷冻保护剂含有5-40mg/ml的人血白蛋白。

进一步优选的，所述玻璃化液中非渗透冷冻保护剂具有与所述平衡液含量相同的人血白蛋白，还含有0.1-2mol/L的蔗糖和海藻糖的任意一种。

优选的，所述玻璃化液中渗透性冷冻保护剂的含量是所述平衡液中渗透性冷冻保护剂含量的0.8-1.5倍。

进一步优选的，所述平衡液和所述玻璃化液中任意一种的渗透性冷冻保护剂由体积百分比为2-30％的乙二醇和二甲基亚砜组成，所述玻璃化液中乙二醇含量高于所述平衡液中乙二醇含量，所述玻璃化液中二甲基亚砜含量高于所述平衡液中二甲基亚砜含量。

进一步优选的，同一平衡液和同一玻璃化液中任意一种的乙二醇和二甲基亚砜具有相同的含量。