[发明专利]超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱检测酒醅中果胶的方法

权利要求书

1.一种检测酒醅中果胶含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）称量酒醅样品，

（2）向酒醅中加入果胶酶；

（3）向酒醅中加入稀酸溶液；

（4）将步骤（3）所得混合物搅拌均质；

（5）将步骤（4）均质得到的混合物于超声波400W条件下处理 30~ 100 min；

（6）取步骤（5）得到的混合液进行离心；

（7）取步骤（6）得到的上清液用乙腈稀释；

（8）取步骤（7）得到的稀释液离心；

（9）将步骤（8）离心得到的上清液用微孔滤膜进行过滤，取滤液用于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析；

（10）超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析；

超高效液相色谱条件：选用ACUITY UPLC HSS T3液相色谱柱，柱子尺寸为2.1 mm×150 mm，1.9 μm，进样量1 μL；流动相：乙腈-5 mmol/L 乙酸铵水溶液；采用梯度洗脱程序：0~2 min乙腈含量为0%，2~5min乙腈含量逐渐升为100%，5~5.5 min乙腈含量逐渐降为0%；5.5~ 7min乙腈含量为0%；流速：350 μL/min；整个分析流程共7 min；

四级杆静电场轨道阱高分辨质谱条件：采用负离子扫描模式，源参数如下：毛细管电压为±3.2 kV，鞘气为40 arb，辅助气为15 arb，吹扫气为0 arb，雾化温度为220 ℃，扫描范围为100～240 amu，分辨率为 70000，扫描模式为一级全扫描＋自动触发二级，离子传输管温度为320 ℃；

制作标准曲线：分别配制不同质量浓度的半乳糖醛酸标准溶液，利用超高效液相色谱、四级杆静电场轨道阱高分辨质谱测定半乳糖醛酸的含量，采用外标法定量；以半乳糖醛酸的含量为纵坐标Y，μg/L、以母离子的色谱峰面积为横坐标X，绘制标准曲线；

将步骤（8）得到的滤液超高效液相色谱、四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱分析，将样品的色谱峰面积代入标准曲线得到样品中半乳糖醛酸的含量。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）向每克酒醅中加入25 ~100 mg果胶酶。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）向每克酒醅中加入50 ~250 mL的pH 2~6的盐酸溶液。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）将步骤（3）所得混合物在4000 r/min条件下均质2 min。

5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）取步骤（5）得到的混合液1mL以12000 r/min离心10 min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（7）取步骤（6）得到的上清液用乙腈稀释4倍。

7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（8）取步骤（7）得到的稀释液以12000r/min离心10 min。