[发明专利]一种猫细小病毒样颗粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猫细小病毒样颗粒，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的猫细小病毒样颗粒，其特征在于，表达其氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的猫细小病毒样颗粒，其特征在于，利用昆虫-杆状病毒表达系统表达。

4.根据权利要求1所述的猫细小病毒样颗粒，其特征在于，其培养工艺为：将生长良好的Sf9细胞调整至1.2×10⁶～1.5×10⁶个/ml的细胞数量接种于生物反应器，在27℃、100～110r/min、DO 40％～60％的条件下悬浮发酵培养；生物反应器中Sf9细胞数量达到6.0×10⁶～8.0×10⁶个/ml时，补充等体积的新鲜培养基，按MOI为0.1～1.0接种，在27℃、100～110r/min、DO 40～60％的条件下继续培养；接毒后96～120小时收获细胞培养物。

5.根据权利要求1所述的猫细小病毒样颗粒，其特征在于，其纯化工艺为：将收获的含有重组杆状病毒FPV-VP2的细胞培养物经细胞富集、裂解、去除细胞碎片、灭活后，使用100KDa膜包以Tris 20mmol/L pH值8.0、NaCl 0.05mol/L为缓冲液A对灭活原液进行换洗，然后采用Q Focurose HPL与缓冲液A进行线性洗脱，收集洗脱峰1，使用100KDa膜包进行10～50倍超滤浓缩，以4％柱床体积上样，采用以Focudex 200PG为介质的分子筛层析纯化，以PBS 10mmol/L pH值7.0为流动相进行洗脱，收集目标峰1，得到纯化后的猫细小病毒样颗粒。

6.根据权利要求1所述的猫细小病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，将生长良好的Sf9细胞调整至1.2×10⁶～1.5×10⁶个/ml的细胞数量接种于生物反应器，在27℃、100～110r/min、DO 40％～60％的条件下悬浮发酵培养；生物反应器中Sf9细胞数量达到6.0×10⁶～8.0×10⁶个/ml时，补充等体积的新鲜培养基，按MOI为0.1～1.0接种利用昆虫-杆状病毒表达系统表达重组杆状病毒FPV-VP2，在27℃、100～110r/min、DO 40～60％的条件下继续培养。接毒后96～120小时收获细胞培养物，将收获的细胞培养物经细胞富集、裂解、去除细胞碎片、灭活后，使用100KDa膜包以Tris20mmol/L pH值8.0、NaCl 0.05mol/L为缓冲液A对灭活原液进行换洗，然后采用Q Focurose HPL与缓冲液A进行线性洗脱，收集洗脱峰1，使用100KDa膜包进行10～50倍超滤浓缩，以4％柱床体积上样，采用以Focudex200PG为介质的分子筛层析纯化，以PBS 10mmol/L pH值7.0为流动相进行洗脱，收集目标峰1，得到纯化后的猫细小病毒样颗粒。

7.根据权利要求1-5任一项所述的猫细小病毒样颗粒在制备猫泛白细胞减少症疫苗中的应用。

8.一种猫泛白细胞减少症疫苗，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的猫细小病毒样颗粒。

9.一种多联疫苗，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的猫细小病毒样颗粒。

10.一种多价疫苗，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的猫细小病毒样颗粒。