[发明专利]一种二萜类衍生物及其制备方法与镇痛药物、小脆柄菇发酵得物及其乙酸乙酯萃取液

权利要求书

1.一种二萜类衍生物，其特征在于，所述二萜类衍生物为化合物4至化合物10中的任意一种，所述化合物4至化合物10的化学结构式依次为：

、、、

、、和

。

2.如权利要求1所述的二萜类衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将小脆柄菇的发酵得物经乙酸乙酯萃取后所得的乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析，硅胶柱层析的条件包括：以氯仿-甲醇为洗脱剂，按氯仿与甲醇的体积比依次为100:0、18-22:1、8-12:1、4-6:1以及0:1的比例进行梯度洗脱；

将第二个梯度对应的洗脱组分进行中压液相色谱分离，中压液相色谱分离条件包括：以甲醇-水为洗脱剂，按甲醇与水的体积比依次为15:85-25:75、35:65-45:55、55:45-65:35、75:25-25:75以及100:0的比例进行梯度洗脱，每个梯度所用的洗脱剂体积为1500-2000mL，将洗脱液按每400-500mL进行单独收集并进行薄层色谱检测，合并显色一致的组分，得到子组分B1至子组分B10；中压液相色谱分离过程中，流速为35-45mL/min；

随后根据所需得到的化合物按照以下对应的方式进行制备：

（a）、将子组分B4依次进行凝胶柱色谱等度洗脱以及高效液相色谱分离，得到化合物6和化合物7；

（b）、将子组分B5依次进行凝胶柱色谱等度洗脱和高效液相色谱分离，得到化合物10、化合物8和化合物9；

（c）、将子组分B6进行高效液相色谱分离，得到化合物4和化合物5；

乙酸乙酯萃取液硅胶柱层析过程中，洗脱流速为18-22mL/min，每个梯度所用的洗脱剂的体积均为1500-2000mL；

子组分B4的凝胶柱色谱等度洗脱条件包括：以纯甲醇作为洗脱剂，洗脱流速为1.5-2.5mL/min，洗脱时间为240min；

随后进行的高效液相色谱的条件包括：以乙腈-水作为洗脱剂，按体积比为15:85-22:78至25:75-35:65进行梯度洗脱，流速为3.5-4.5mL/min，洗脱时间为30-40min；

子组分B5的凝胶柱色谱等度洗脱条件包括：以纯甲醇作为洗脱剂，洗脱流速为1-2mL/min，洗脱时间为120-360min；

随后进行的高效液相色谱的条件包括：以乙腈-水作为洗脱剂，按体积比为15:85-20:80至30:70-40:60进行梯度洗脱，流速为3.5-4.5mL/min，洗脱时间为35-55min；

子组分B6的高效液相色谱的条件包括：以乙腈-水作为洗脱剂，按体积比为15:85-25:75进行等度洗脱，流速为3.5-4.5mL/min，洗脱时间为35-55min；

所述发酵得物包括小脆柄菇发酵后的发酵液和固态菌丝体；

发酵包括：将小脆柄菇与液体培养基混合，随后进行发酵培养；

其中，所述液体培养基的成分包括水、葡萄糖、猪肉蛋白胨、酵母粉、KH₂PO₄以及MgSO₄，每升水中溶有4.8-5.2wt%的葡萄糖、0.12-0.18wt%的猪肉蛋白胨、0.45-0.55wt%的酵母粉、0.045-0.055wt%的KH₂PO₄以及0.045-0.055wt%的MgSO₄；

发酵是于23-28℃、转速为140-180rpm的条件下避光培养20-30天；

所述乙酸乙酯萃取液经以下方式得到：

将小脆柄菇发酵后所得的发酵液和固态菌丝体分别进行以下处理：

将所述发酵液进行乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层；将所述固态菌丝体依次进行丙酮提取和乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层；混合所述发酵液对应所得的乙酸乙酯层以及所述固态菌丝体对应所得的乙酸乙酯层，得乙酸乙酯萃取液。

3.一种镇痛药物，其特征在于，其包括权利要求1所述的二萜类衍生物。