[发明专利]一种红花山玉兰种质资源的保存方法

权利要求书

1.一种红花山玉兰种质资源的保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将红花山玉兰胚性愈伤组织与装载溶液混合进行装载处理，得装载愈伤组织；所述装载溶液包括：WPM基础培养基、甘油184g/L和蔗糖136.8g/L；

所述红花山玉兰胚性愈伤组织的制备方法包括：将红花山玉兰种子在诱导培养基中诱导培养4月，每隔1月换一次培养基；所述诱导培养基以WPM为基础培养基，还仅含有以下组分：2,4-D 2mg/L、6-BA 0.25mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1g/L、水解酪蛋白1g/L、蔗糖40g/L和植物凝胶3g/L，所述诱导培养基的pH值为5.8；

所述红花山玉兰胚性愈伤组织与装载溶液的体积比为1:8；

(2)将所述装载愈伤组织与玻璃化溶液混合进行玻璃化处理，得玻璃化愈伤组织；所述玻璃化溶液包括WPM基础培养基、甘油300g/L、乙二醇150g/L、二甲基亚砜150g/L和蔗糖0.4mol/L；所述装载愈伤组织与玻璃化溶液的体积比为1:8；

(3)将所述玻璃化愈伤组织置于液氮中保存；所述保存后，还包括对经过保存的愈伤组织进行恢复；

所述恢复的方法，包括以下步骤：

(a)将所述经过保存的愈伤组织置于40℃水浴中解冻；

(b)将解冻后的愈伤组织与卸载溶液混合后，进行卸载处理，得卸载愈伤组织；所述卸载溶液包括WPM基础培养基和蔗糖410.4g/L，所述卸载溶液的pH值为5.8；

(c)将所述卸载愈伤组织转移到所述诱导培养基中进行恢复培养。

2.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述诱导培养为暗培养，所述诱导培养的温度为25℃。

3.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于，步骤(2)所述玻璃化处理的温度为0～4℃，所述玻璃化处理的时间为30min。

4.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于，步骤(3)所述保存的时间至少为24h。

5.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于，在步骤(c)所述转移前，还包括利用WPM液体培养基清洗所述卸载愈伤组织，再将清洗后的卸载愈伤组织与WPM液体培养基混合，最后除去所述WPM液体培养基。