[发明专利]一种红花山玉兰种质资源的保存方法

说明书

本发明涉及红花山玉兰种质保存技术领域，特别是涉及一种红花山玉兰种质资源的保存方法。本发明所述红花山玉兰种质资源的保存方法利用胚性愈伤组织在适宜的装载溶液中进行装载处理，并在适宜的玻璃化溶液中进行玻璃化处理从而完成超低温保存。本发明提供的方法相比于现有的原地建立保护区存、迁地保存，具有永久保存、不受自然环境变化的影响、保存效率高、遗传稳定性高和方便管理的优势。另外，保存的玻璃化愈伤组织再生后可以快速进行增殖和分化，分化的体细胞胚直接发育成植株，且转化率高，无需进行生根培养。本发明超低温保存的再生率为90％，能够长期对红花山玉兰种质资源进行超低温保存。

技术领域

本发明涉及红花山玉兰种质保存技术领域，特别是涉及一种红花山玉兰种质资源的保存方法。

背景技术

红花山玉兰(Magnolia delavayi)是木兰科木兰属山玉兰中的一个变种。树形态优美，叶形秀丽，花大艳丽呈红色，具有香味，有一定的抗污效果，是优良的庭院景观、城市绿化树种。目前，云南省已将其作为乡土树种收录于《云南省城市绿化树种名录》，并在滇中、滇西、滇西北和滇东南等地作为行道树和观赏树应用于城市绿化。

目前红花山玉兰的繁殖方式主要为种子育种。红花山玉兰种群数量较少，本身产生的种子就少。再加上红花山玉兰是雌雄异熟，阻碍了昆虫的传粉，自然状态下结实率低，而且结实容易受到气候条件和生境的影响，想要获得大量的种子用于植株繁殖存在一定的困难。由于自然条件的变化，资源和分布急剧下降，现已被列为国家二级保护野生植物。因此红花山玉兰种质资源的保存成为了红花山玉兰的可持续利用的关键。目前对于红花山玉兰的种质资源保存多是通过建立保护区，和迁地引种保存。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种红花山玉兰种质资源的保存方法。本发明提供的方法简便易行、稳定性高、高效可靠，利用胚性愈伤组织的分化能力，经保存后，还能快速大量的分化成红花山玉兰体细胞胚，并进一步的发育成完整植株，且植株移栽后生长状态良好。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种红花山玉兰种质资源的保存方法，包括以下步骤：

(1)将红花山玉兰胚性愈伤组织与装载溶液混合进行装载处理，得装载愈伤组织；所述装载溶液包括：WPM基础培养基、甘油184g/L和蔗糖136.8g/L；

(2)将所述装载愈伤组织与玻璃化溶液混合进行玻璃化处理，得玻璃化愈伤组织；所述玻璃化溶液包括WPM基础培养基、甘油300g/L、乙二醇150g/L、二甲基亚砜150g/L和蔗糖0.4mol/L；

(3)将所述玻璃化愈伤组织置于液氮中保存。

优选的，步骤(1)所述红花山玉兰胚性愈伤组织的制备方法包括：将红花山玉兰种子在诱导培养基中诱导培养4月，每隔1月换一次培养基所述诱导培养基以WPM为基础培养基，还包括以下组分：2,4-D 2mg/L、6-BA 0.25mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1g/L、水解酪蛋白1g/L、蔗糖40g/L和植物凝胶3g/L，所述诱导培养基的pH值为5.8；

优选的，所述诱导培养为暗培养，所述诱导培养的温度为25℃。

优选的，步骤(1)所述混合时，所述红花山玉兰胚性愈伤组织与装载溶液的体积比为1:8。

优选的，步骤(2)所述混合时，所述装载愈伤组织与玻璃化溶液的体积比为1:8。

优选的，步骤(2)所述玻璃化处理的温度为0～4℃，所述玻璃化处理的时间为30min。

优选的，步骤(3)所述保存的时间至少为24h。

优选的，在步骤(3)所述保存后，还包括对经过保存的愈伤组织进行恢复。

优选的，所述恢复的方法，包括以下步骤：