[发明专利]耳聋遗传基因突变检测试剂盒、试剂组合、探针以及检测基因突变的方法

权利要求书

1.耳聋遗传基因突变检测试剂盒，其特征在于：包括前处理液、扩增反应液和突变检测液组，所述突变检测液组选自突变检测液A、突变检测液B、突变检测液C和突变检测液D中的至少一种；

所述前处理液包括Tween20、NP-40、Triton-X100、PVP和NaOH；

所述扩增反应液包括热启动Taq酶、UNG酶、dNTP、dUTP、5×PCR缓冲液，所述5×PCR缓冲液包括Tris-HCl、MgCl₂、BSA、甘露醇、(NH4)₂SO₄、Tween20和海藻糖；

所述突变检测液A包括用于特异性扩增含有突变位点组合A的目标片段的扩增引物和特异于所述目标片段的探针，所述突变位点组合A包括选自GJB2基因35位点、GJB2基因167位点、GJB2基因176_191位点、GJB2基因299_300位点、GJB2基因235位点和SLC26A4基因1707+5位点中至少一种；

所述突变检测液B包括用于特异性扩增含有突变位点组合B的目标片段的扩增引物和特异于所述目标片段的探针，所述突变位点组合B包括选自SLC26A4基因919位点、SLC26A4基因1174位点、SLC26A4基因1226位点、SLC26A4基因1229位点、GJB3基因538位点和GJB3基因547位点中的至少一种；

所述突变检测液C包括用于特异性扩增含有突变位点组合C的目标片段的扩增引物和特异于所述目标片段的探针，所述突变位点组合C包括选自线粒体12S rRNA基因1494位点、线粒体12S rRNA基因1555位点、SLC26A4基因2162位点、SLC26A4基因2168位点、SLC26A4基因1975位点和SLC26A4基因2027位点中的至少一种；

所述突变检测液D包括用于特异性扩增含有突变位点组合D的目标片段的扩增引物和特异于所述目标片段的探针，所述突变位点组合D包括选自SLC26A4基因917位点、SLC26A4基因281位点、SLC26A4基因589位点、GJB2基因427位点和GJB2基因512位点中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的耳聋遗传基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述前处理液包括0.5％-2.5％Tween20、0.02％-1％NP-40、0.05％-0.2％Triton-X100、0.02％-1％PVP、0.02-0.4M NaOH；所述扩增反应液包括0.5-2U热启动Taq酶、0.025-0.25U UNG酶、5-10nmoldNTP、5-10nmol dUTP、5×PCR缓冲液；所述扩增反应液中的5×PCR缓冲液包括50-500mMTris-HCl(pH 8.8)、15-30mM MgCl₂、0.25％-10％(质量百分比)BSA、0％-15％(质量百分比)甘露醇，50-200mM(NH4)₂SO₄、0.025％-0.5％(体积百分比)Tween20和5-30％(质量百分比)海藻糖。

3.根据权利要求1或2所述的耳聋遗传基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述探针由与所述目标片段特异结合的突变检测探针和与所述目标片段特异结合的锚定探针组成，所述突变检测探针与所述突变位点特异结合，所述突变检测探针和所述锚定探针这两种探针中，一种探针标记一端荧光基团，另一种探针一端标记相应的淬灭基团，所述突变检测探针和锚定探针与所述目标片段结合后，所述淬灭基团与所述荧光基团相互作用不产生荧光。