[发明专利]一种酶法制备不溶葡聚糖并进行化学修饰的方法

说明书

本发明公开了一种酶法制备不溶葡聚糖并进行化学修饰的方法。利用右旋糖酐蔗糖酶催化蔗糖得到不溶性葡聚糖，然后通过混合聚乙烯亚胺和葡聚糖来进行化学修饰。右旋糖酐酶最适催化pH为6.0，温度为30℃。经过化学修饰的葡聚糖其zate电位由电负性变为电正性，并且在溶胀能力等其他方面有较强提升，为今后葡聚糖的广泛应用提供了更多可能。

技术领域

本发明属于葡聚糖的制备及后续化学衍生领域，具体涉及一种酶法制备不溶葡聚糖并进行化学修饰的方法。

背景技术

葡聚糖作为一种以葡萄糖为单体的聚合物，在医疗、食品、石油开采、化妆等领域应用广泛，化学改性是多糖改性最常用的方法之一，其中基团修饰能够增强多糖的生物活性，如抗氧化、抑菌、提升溶胀能力等。

聚乙烯亚胺(PEI)作为不溶葡聚糖的修饰化合物，在工业上广泛应用，且价格便宜。通过将不溶葡聚糖与PEI在一定浓度下搅拌混合，葡聚糖的zate电位可以由电负性变为电正性，经过修饰后葡聚糖的溶胀能力有了明显提升，并且具有了一定的抑菌效果。

发明内容

本发明的目的是：提供一种酶法制备不溶葡聚糖并进行化学修饰的方法。该方法工艺简单可控、不溶葡聚糖制备效率高，可以较好的提高不溶葡聚糖的生物活性，且实现了良好的抑菌效果，为不溶葡聚糖的广泛应用提供了无限可能。

本发明所述的不溶葡聚糖的制备及化学修饰方法，由以下步骤组成：

(1)将右旋糖酐蔗糖酶基因和表达载体pET28a(+)相连接，并将连接产物转化至大肠杆菌BL21，获得包含右旋糖苷酶的重组菌株；

(2)将重组载体进行扩大培养，诱导菌株进行右旋糖酐蔗糖酶的表达；

(3)对含重组菌株的菌液进行高压匀浆破碎，离心后获得含右旋糖酐蔗糖酶的酶液；

(4)酶活通过测定蔗糖转化过程中果糖的释放来确定；

(5)将步骤(3)得到的酶液与蔗糖按比例混合反应；

(6)向步骤(5)中反应液加入95％乙醇，离心后得到不溶葡聚糖；

(7)将步骤(6)得到的不溶葡聚糖放入冻干机冻干，得到纯的不溶葡聚糖产品；

(8)将步骤(7)中的葡聚糖与PEI进行混合得到修饰后的不溶葡聚糖。

具体的，所述右旋糖酐蔗糖酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

具体的，步骤(2)中所述的感受态细胞BL21扩大培养所用的培养基为LB培养基。

具体的，步骤(3)中所述的离心条件为8000r，10min，4℃。

具体的，步骤(5)中所述的酶的添加量为10U/ml，蔗糖添加量为100g/L。

具体的，步骤(6)中所述的离心条件为8000r，10min。

具体的，步骤(8)中所述的反应条件为聚乙烯亚胺(PEI)：葡聚糖＝10mg/mL：10mg/mL，反应时间24h。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

本发明所述的酶法制备不溶葡聚糖的制备方法，工艺简单可控，制备效率高，经过修饰后的葡聚糖在溶胀能力、抑菌性等方面有较好的表现。

附图说明

图1是本发明产物不溶葡聚糖修饰前和修饰后不溶葡聚糖的zate电位值。

图2是本发明产物不溶葡聚糖修饰前和修饰后不溶葡聚糖核磁共振碳谱。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步描述。