[发明专利]一种超高浓啤酒酿造菌株的高通量选育方法

说明书

本发明适用于微生物发酵工程技术领域，提供了一种超高浓啤酒酿造菌株的高通量选育方法，包括以下步骤：步骤1：应用ARTP诱变技术得到超高浓菌株突变体库；步骤2：使用基于液滴微流控技术的高通量筛选方法选育超高浓酿造菌株；步骤3：MMC微流控选育及菌株适应性驯化；步骤4：梯度平板选育；步骤5：糖代谢力复筛；步骤6：优选菌株的酿造性能分析。该方法有效的增加了每次筛选的菌株数量，缩短了筛选的周期，降低筛选工作强度，提高了整个筛选的工作效率及目标性，得到适合下面发酵的超高浓酿造菌株。

技术领域

本发明属于微生物发酵工程技术领域，尤其涉及一种超高浓啤酒酿造菌株的高通量选育方法。

背景技术

啤酒超高浓酿造(麦汁浓度18～25°P)是指在啤酒生产过程中采用比正常浓度更高的麦汁浓度进行发酵，并在发酵后期用水稀释成常规浓度啤酒的技术。

常压室温等离子体诱变(Atmospheric and room temperature plasma，ARTP)是近年来利用在大气压下产生的，温度在25～40℃之间，具有高活性粒子浓度的等离子体射流的新型诱变技术，具有操作简便、设备简单、条件温和、安全性高及诱变快速等优良特性。对啤酒酵母等真菌的诱变会比常规的紫外诱变效果更加明显，且诱变菌能够被用于食品行业的生产。

液滴微流控是一种近几年新发展起来的高通量筛选技术。从样品制备，反应培养到最后的检测，分选均在微小芯片中的微通道内完成，其最大优势在于可将单细胞包埋于液滴中，每个液滴都可作为独立的微反应器进行细胞培养及代谢产物生产，最高筛选通量达108/d，具有检测试剂消耗成本低、速度快、通量高等显著特点，可对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、酿酒酵母等不同类型微生物在内，进行具备不同细胞特性或一些代谢产物的高通量筛选。

啤酒酵母作为啤酒酿造的核心，在高浓胁迫下的啤酒酵母存在活力下降、形态异常、代谢异常、衰老死亡乃至自溶等问题。因此，在传统啤酒酵母“黑箱操作”筛选技术的基础上，建立目的性和预见性更明确的快速选育方法，基于风味导向选育超高浓酿造酵母菌株，是本领域急需解决的问题。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种超高浓啤酒酿造菌株的高通量选育方法，旨在解决啤酒酵母作为啤酒酿造的核心，在高浓胁迫下的啤酒酵母存在活力下降、形态异常、代谢异常、衰老死亡乃至自溶的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种超高浓啤酒酿造菌株的高通量选育方法，包括以下步骤：

步骤1：应用ARTP诱变技术得到超高浓菌株突变体库；

步骤2：使用基于液滴微流控技术的高通量筛选方法选育超高浓酿造菌株；

步骤3：MMC微流控选育及菌株适应性驯化；

步骤4：梯度平板选育；

步骤5：糖代谢力复筛；

步骤6：优选菌株的酿造性能分析。

1.进一步的技术方案，所述步骤1的具体步骤包括：

步骤1.1：选择处于对数生长中期的出发菌株细胞进行等离子诱变，测定致死率，绘制出发菌株的等离子诱变致死率曲线，确定合适的等离子诱变时间；

步骤1.2：选择致死率在85％左右的等离子诱变时间作为诱变处理条件，对酵母菌株进行等离子诱变，依据相应的ARTP诱变条件多批次处理备选菌株，构建酵母诱变突变库。

2.进一步的技术方案，所述步骤2的具体步骤包括：

步骤2.1：连续筛选培养基，

A：蛋白胨2％(w/v)，酵母膏2％(w/v)，琼脂2.0％(w/v)，麦芽糖5％(w/v)，乙醇5％(w/v)；