[发明专利]RHDV2荧光定量RT-PCR检测方法

说明书

本发明提供了一种荧光定量RT‑PCR检测RHDV2的引物探针组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明所述引物探针组是由引物F、引物R和探针T组成：所述引物F的序列为：5’‑GAGTGTTGATGGRTACTTC‑3’，所述引物R的序列为：5’‑CCCAAGTTGTACACAAGC‑3’，所述探针T的序列为：5’‑AGCCACCCTCATYGACCTGT‑3’，所述探针T的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。本发明提供的引物探针组及其检测方法能够针对于兔病毒性出血症2型进行快速检测，所得结果准确，特异性好、灵敏度高。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种荧光定量 RT-PCR检测兔病毒性出血症2型(RHDV2)的引物、试剂盒及其检测方法。

背景技术

家兔养殖在我国已有悠久的历史，因兔肉口感好，营养价值高，一直受到广大人民群众的喜爱。自20世纪90年代以来，我国的兔肉产量一直以年均8.5％左右的速度增长，2016年我国的兔出栏量约 5.62亿只，占全球的55.4％，是世界上主要的家兔养殖国。四川兔产业处于全国前列，根据中国畜牧业协会兔业分会统计，2016年四川共销售近3亿只兔子，占全国市场近7成，兔产业成为四川农民致富的重要途径。

兔病毒性出血症2型，也称兔瘟2型，是由兔病毒性出血症2型病毒(RHDV2)引起的一种急性、高度接触性、高致病性的家兔传染病，死亡率高达90％，特别是幼龄兔，死亡率可达100％。从2010 年，该病首次在法国出现后，逐渐蔓延至意大利、西班牙、葡萄牙等国，给养兔业造成了非常重大的影响。2020年4月，四川某家兔养殖场首次发生了兔瘟2型疫情，虽然经过一系列严格的处置措施，没有造成更大的经济损失，但是目前，我国的兔瘟疫苗仅能预防经典兔瘟，对兔瘟2型缺乏针对性的保护力，也没有市售的兔瘟2型疫苗，因此兔瘟2型对我国养兔业仍然有非常大的威胁。

目前针对于该病的检测方法仍然没有统一的国家标准、地方标准和行业标准，现仅有中国畜牧兽业协会发布的一个团体标准。但该标准规定的诊断技术方法虽然很多，但是操作复杂，无法满足于临床对该病的快速诊断要求。

因此，急需开发一种能够针对于兔病毒性出血症2型进行快速检测的方法，以解决临床上难以通过肉眼判断经典兔病毒性出血症与兔病毒性出血症2型的难题。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述技术问题，从而提供一种荧光定量RT-PCR检测兔病毒性出血症2型(RHDV2)的引物、试剂盒及其检测方法。本发明提供的检测方法能够针对于兔病毒性出血症2型进行快速检测，所得结果准确，灵敏度高，可用于临床快速判断经典兔病毒性出血症与兔病毒性出血症2型。

本发明的目的之一是提供一种荧光定量RT-PCR检测兔病毒性出血症2型的引物探针组，所述引物探针组是由引物F、引物R和探针T组成：

所述引物F的序列为：5’-GAGTGTTGATGGRTACTTC-3’，

所述引物R的序列为：5’-CCCAAGTTGTACACAAGC-3’，

所述探针T的序列为：5’-AGCCACCCTCATYGACCTGT-3’，所述探针T的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

本发明的目的之二是提供一种包含上述引物探针组的时荧光定量RT-PCR检测兔病毒性出血症2型的试剂盒。

本发明的目的之三是提供上述引物探针组在制备用于荧光定量 RT-PCR检测兔病毒性出血症2型的试剂盒中的应用。

本发明的目的之四是提供一种用于兔病毒性出血症2型的荧光定量RT-PCR检测方法，包括如下步骤：