[发明专利]一株产L-乳酸的酿酒酵母的改造及其应用

权利要求书

1.一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母为如(a)～(d)所示任一：

(a)过表达苹果酸脱氢酶2；

(b)过表达苹果酸脱氢酶2、异源表达来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶并敲除苹果酸脱氢酶1；

(c)过表达苹果酸脱氢酶2、异源表达来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶和来源于大肠杆菌的磷酸果糖激酶并敲除苹果酸脱氢酶1及NADH脱氢酶NDE1；

(d)过表达苹果酸脱氢酶2、异源表达来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶和来源于大肠杆菌的磷酸果糖激酶，并敲除苹果酸脱氢酶1、NADH脱氢酶NDE1和NDE2。

2.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，将所述来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶和来源于大肠杆菌的磷酸果糖激酶整合至酿酒酵母基因组的NADH脱氢酶NDE1位点。

3.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，将所述乳酸脱氢酶和来源于大肠杆菌的磷酸果糖激酶整合至酿酒酵母基因组的NADH脱氢酶NDE2位点。

4.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，以酿酒酵母TJG12为宿主细胞。

5.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述的苹果酸脱氢酶1(MDH1)的Gene ID为:853777；所述的苹果酸脱氢酶2(MDH2)的Gene ID为:853994；所述的NADH脱氢酶1(NDE1)的Gene ID为:855176；所述的NADH脱氢酶2(NDE2)的Gene ID为:851474。

6.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述来源于大肠杆菌的6-磷酸果糖激酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述来源于乳酸菌的乳酸脱氢酶的编码基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.一种生产L-乳酸的方法，其特征在于，利用权利要求1～6任一所述重组酿酒酵母发酵生产L-乳酸。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将所述重组酿酒酵母培养至OD₆₀₀＝3±0.5，按照体积比8％～10％的量接种至YPD培养基中，在28～35℃，200～220rpm下培养，培养至体系中葡萄糖含量低于3g/L时，连续补加葡萄糖维持体系中葡萄糖的含量3～5g/L。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在补加葡萄糖的同时添加终浓度为10～15g/L的半乳糖。

10.权利要求1～6任一所述的重组酿酒酵母在制备L-乳酸、L-乳酸衍生物、含有L-乳酸的产品及含有L-乳酸衍生物的产品中的应用。