[发明专利]一种核酸质谱盐离子干扰评价方法

说明书

本发明公开一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，该方法包括：根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰；根据所述盐离子加合峰的峰型特征和分布特征对所述盐离子进行干扰评价，所述干扰评价包括盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预期纯化剂更换时间中的一种或多种。本发明通过分析盐离子产生的加合物形成的加合峰的峰型特征和分布特征来识别PCR反应产物中盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预测纯化剂更换时间及对于已经产生影响的目标峰进行补偿。

技术领域

本发明涉及生物质谱检测的技术领域，尤其涉及一种核酸质谱盐离子干扰评价方法。

背景技术

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI TOF MS)是八十年代末发展起来的一种新的质谱分析技术，是激光电离技术和高速数据采集处理系统相结合的产物。经过多年的发展，MALDI TOF MS由于其简单快速、高通量和高灵敏度的优势，已被广泛应用于核酸、糖、蛋白质等生物大分子及合成高聚物分子的分子量测定和结构分析。

MALDI TOF MS技术是将聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)扩增延伸后的样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。

核酸样品经PCR扩增反应或/和延伸反应后，反应产物中带有大量的盐离子，如Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Mn²⁺等金属阳离子，以下简称盐离子，因核酸扩增和/和延伸产物带有磷酸根，极性和负电性大，容易吸附盐离子，形成一种加合物，加合物产生的加合峰为干扰峰，核酸反应产物的目标峰附近出现盐离子而产生加合峰时，当加合峰与目标峰不重合时对于目标峰影响较少，当加合峰与目标峰重合时，可能造成目标峰变宽信噪比下降、分辨率下降、峰高升高、峰面积加大，峰偏移等不利于质谱分析结果判读。

发明内容

本发明提供一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，以至少解决现有技术中存在的以上技术问题。

本发明一方面提供一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，该方法包括：

根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰；

根据所述盐离子加合峰的峰型特征和分布特征对所述盐离子进行干扰评价，所述干扰评价包括盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预期纯化剂更换时间中的一种或多种。

在一可实施方式中，所述盐离子加合峰位于核酸质谱图中目标峰的位置处或目标峰的右侧，所述目标峰为PCR反应中目标对象形成的质谱峰，所述目标对象为核酸样本的延伸引物或/和延伸产物。

在一可实施方式中，所述目标对象包含但不限于核酸样本的延伸引物、核酸样本的腺嘌呤A型延伸产物、核酸样本的鸟嘌呤G型延伸产物、核酸样本的胞嘧啶C型延伸产物、核酸样本的胸腺嘧啶T型延伸产物、核酸样本尿嘧啶的U型延伸产物中的一种或多种。

在一可实施方式中，在PCR反应中，所述目标对象与所述盐离子反应生成加合物，所述加合物的分子量为所述目标对象的分子量与所述盐离子的分子量之和。

在一可实施方式中，所述盐离子加合峰的峰型特征包括分子量、峰高、峰面积、信噪比、分辨率中的一种或多种。

在一可实施方式中，所述盐离子加合峰包括独立加合峰和重叠加合峰；