[发明专利]胞苷羟化酶及其基因、用途和新冠口服药Molnupiravir的合成方法

权利要求书

1.一种胞苷羟化酶，其特征在于，所述胞苷羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种胞苷羟化酶，其特征在于，所述胞苷羟化酶的氨基酸序列经SEQ ID NO:1的定点突变得到；所述定点突变为将第133位天冬酰胺 N突变为丝氨酸S和/或第155位异亮氨酸I突变为缬氨酸V和/或第133位天冬酰胺N突变为丝氨酸S和/或第155位异亮氨酸I突变为缬氨酸V和/或第157位亮氨酸L突变为缬氨酸V 。

3.一种权利要求2所述的胞苷羟化酶，其特征在于，所述胞苷羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.一种编码权利要求1-3任一所述的胞苷羟化酶的基因。

5.一种编码权利要求1或3所述的胞苷羟化酶的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:4所示。

6.一种权利要求1-3任一所述的胞苷羟化酶的用途，其特征在于，所述胞苷羟化酶用做制备N-羟基胞苷的生物催化剂。

7.如权利要求6所述胞苷羟化酶的用途，其特征在于，制作所述胞苷羟化酶时，以胞苷为底物，以胞苷羟化酶作为生物催化剂，胞苷羟化酶在反应体系中的终浓度为0 .1g/L～10g/L。

8.如权利要求7所述的胞苷羟化酶的用途，其特征在于，制作所述胞苷羟化酶时，以胞苷为底物，以10 %的羟胺水溶液为反应介质，在4～16℃，100～300r/min条件下反应，催化反应的时间为3～6h，制得N-羟基胞苷。

9.一种新冠口服药Molnupiravir的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、以胞苷为底物，以10 %的羟胺水溶液为反应介质，以胞苷羟化酶作为生物催化剂构建反应体系，在4～16℃，100～300r/min条件下反应，催化反应的时间为3～6h，制得N-羟基胞苷；其中N-羟基胞苷在反应体系中的终浓度为0 .1g/L～10g/L；胞苷羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示或SEQ ID NO:3所示；

步骤二、反应后的N-羟基胞苷反应液离心后去除上清，加入异丁酸肟酯和脂肪酶，以1,4-二氧六环为反应介质，在40℃，50～100 r/min条件下反应，催化反应的时间为1～2h，制得Molnupiravir。

10.如权利要求9所述的新冠口服药Molnupiravir的合成方法，其特征在于，所述步骤二中，Molnupiravir的合成方法，其特征在于，步骤一中，胞苷在反应体系中的初始浓度为50～200g/L ；步骤二中，反应后的N-羟基胞苷反应液3000 rpm/min离心10分钟后去除上清；异丁酸肟酯的终浓度为180 g/L，脂肪酶的终浓度≥10,000 U/L。