[发明专利]一种快速检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种快速检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条及其制备方法，用胶体金标记兔抗鸭IgG抗体，包被玻璃纤维膜制成金标垫；多杀性巴氏杆菌荚膜糖蛋白喷涂于硝酸纤维素膜的检测线；羊抗兔IgG抗体喷涂于硝酸纤维素膜的质控线；将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸首尾相连依次粘贴在PVC底板上，组装成检测试纸条。检测时取100μL鸭血清，滴加于样品垫，3min内观察即可凭肉眼判断阴阳性。该方法简单、快速、结果易判定，为禽巴氏杆菌病感染鸭的流行病学调查、鸭的巴氏杆菌病疫苗免疫程序制定提供科学依据。

技术领域

本发明属于家禽传染病学领域，具体涉及一种快速检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

禽巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的可侵害各种禽类的一种慢性或急性接触性、败血性传染病，是危害养禽业最为重要的细菌性传染病，也是许多国家和地区列为重点预防的一种疾病。所有鸭的品种均易感，1月龄以内的鸭对禽巴氏杆菌病的易感性略低，成年鸭的易感性高，产蛋鸭最易感。生物安全的饲养模式加上合理的免疫接种是预防该病的有效方法。鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的检测，可以为禽巴氏杆菌病的流行病学调查提供数据，也可以监测疫苗免疫后抗体的消长规律，为制定合理的免疫程序提供科学依据。

现有的检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的方法有全血清平板凝集试验、琼脂扩散试验、间接血凝试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)等。全血清平板凝集试验简单易行，几分钟即可出结果，但凝集抗原存在自凝问题，结果易受非特异性因素的影响而造成假阳性，影响结果的准确性。琼脂扩散试验操作简便，需时较长，一般需1～3天，且灵敏度不高。间接血凝试验的敏感性与琼脂扩散试验相似，几分钟即可出结果，但间接血凝抗原的制备很繁琐，需要制备细菌的热浸抗原或超声波粉碎抗原，然后致敏绵羊红细胞，且这种抗原不易保存，2个月后效价即降低且非特异性升高。以多杀性巴氏杆菌的全菌、超声波裂解液或原核表达的重组蛋白作包被抗原，已建立了多种间接ELISA，敏感性大大提高，特异性也好，一次检测需时数小时即可，但对仪器设备、人员素质等的要求较高。基层兽医站和养殖场迫切需要简单、快速、不需要精密仪器且能保证检测准确性和一定敏感度的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条及其制备方法与应用。

本发明具体的技术方案如下：

一种快速检测鸭血清中多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条，它包括PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。PVC底板的一端粘附样品垫，是样品加样处；PVC底板的另一端粘附有吸水垫，其中部依次粘附有金标垫、硝酸纤维素膜；金标垫的一端与样品垫相粘附，另一端与硝酸纤维素膜相粘附，硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相粘附；

所述金标垫包被了胶体金标记的兔抗鸭IgG抗体；

所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有检测线和质控线；所述硝酸纤维素膜的检测线包被多杀性巴氏杆菌荚膜糖蛋白，所述硝酸纤维素膜的质控线包被羊抗兔IgG抗体。

优选的，金标垫上，胶体金标记的兔抗鸭IgG抗体的包被浓度为2～20μg/mL。

优选的，硝酸纤维素膜上检测线，多杀性巴氏杆菌荚膜糖蛋白的包被浓度为0.1～1mg/mL。

优选的，硝酸纤维素膜上质控线，羊抗兔IgG抗体的包被浓度为0.2～2mg/mL。

所述的胶体金试纸条的制备方法，它包括以下步骤：

(1)多杀性巴氏杆菌荚膜糖蛋白的提取；

(2)兔抗鸭IgG抗体的胶体金标记；