[发明专利]用于制备脑/神经类器官的培养基及其应用、脑/神经类器官及其制备方法有效
| 申请号： | 202210321881.1 | 申请日： | 2022-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN114606178B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 刘特;聂小丽;黄永毅;陈川;郁志华 | 申请（专利权）人： | 上海市中医老年医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/079;C12N5/0793 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 制备 神经 器官 培养基 及其 应用 方法 | ||
1.培养基在制备脑/神经类器官中的应用，其特征在于，所述培养基由第一诱导培养基和第二诱导培养基组成；
所述第一诱导培养基由DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2supplement、ActivinA、bFGF、EGF、视黄酸、vEGF和抗坏血酸组成；
所述第二诱导培养基由DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2supplement、ActivinA、bFGF、EGF、vEGF、抗坏血酸、R3-IGF-1、皮质醇和肝素组成。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一诱导培养基中各成分的浓度为：FBS15％V/V、青霉素-链霉素混合液1％V/V、L-谷氨酰胺1％V/V、B27supplement2％V/V、N2supplement1％V/V、ActivinA10ng/mL、bFGF10ng/mL、EGF10ng/mL、视黄酸10ng/mL、vEGF10ng/mL、抗坏血酸50ng/mL和余量的DMEM。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二诱导培养基中各成分的浓度为：FBS15％V/V、青霉素-链霉素混合液1％V/V、L-谷氨酰胺1％V/V、B27supplement2％V/V、N2supplement1％V/V、ActivinA10ng/mL、bFGF10ng/mL、EGF10ng/mL、vEGF10ng/mL、抗坏血酸50ng/mL、R3-IGF-110ng/mL、皮质醇10ng/mL、肝素10ng/mL和余量的DMEM。
4.一种脑/神经类器官的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
依次利用第一诱导培养基和第二诱导培养基对NE-4C细胞进行第一诱导和第二诱导；
所述第一诱导培养基由DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2supplement、ActivinA、bFGF、EGF、视黄酸、vEGF和抗坏血酸组成；
所述第二诱导培养基由DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2supplement、ActivinA、bFGF、EGF、vEGF、抗坏血酸、R3-IGF-1、皮质醇和肝素组成。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一诱导的时间为2d；所述第二诱导的时间为6d。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述第一诱导和第二诱导的条件分均为37℃、5％CO2培养。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括所述NE-4C细胞的基础培养。
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