[发明专利]用于制备脑/神经类器官的培养基及其应用、脑/神经类器官及其制备方法

说明书

本发明属于类器官制备技术领域，具体涉及用于制备脑/神经类器官的培养基及其应用、脑/神经类器官及其制备方法。本发明提供的培养基可以对NE‑4C细胞诱导，制备脑/神经类器官，丰富了制备脑/神经类器官的种子细胞种类；NE‑4C细胞经本发明培养基诱导10～12d即可以分化出含有神经元、胶质细胞、血管内皮细胞等的复合脑/神经类器官，缩短了脑/神经类器官的制备周期，提高了效率。

技术领域

本发明属于类器官制备技术领域，具体涉及用于制备脑/神经类器官的培养基及其应用、脑/神经类器官及其制备方法。

背景技术

类器官属于三维(3D)细胞培养物，包含其代表器官的一些关键特性。此类体外培养系统包括一个自我更新干细胞群，可分化为多个器官器官特异性的细胞类型，与对应的器官拥有类似的空间组织并能够重现对应器官的部分功能，从而提供一个高度生理相关系统。目前，脑/神经类器官，即类脑器官，主要由多能干细胞如，诱导多能分化干细胞(iPS)、胚胎干细胞(ES)通过体外的三维培养方法，在特定的试剂诱导下分化而来。但是，无论是iPS还是ES细胞，其对于培养环境和培养技术的要求非常高，且培养试剂昂贵，而且制备脑/神经类器官的周期较长，步骤较为繁琐，给脑/神经类器官的制备带来了一定的不便。

发明内容

本发明的目的提供用于制备脑/神经类器官的培养基及其应用、脑/神经类器官及其制备方法，缩短脑/神经类器官的制备周期，提高脑/神经类器官的制备效率。

本发明提供了一种用于制备脑/神经类器官的培养基，包括第一诱导培养基和第二诱导培养基；

所述第一诱导培养基包括DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2 supplement、ActivinA、bFGF、EGF、视黄酸、vEGF和抗坏血酸；

所述第二诱导培养基包括DMEM、FBS、青霉素-链霉素混合液、L-谷氨酰胺、B27supplement、N2 supplement、ActivinA、bFGF、EGF、vEGF、抗坏血酸、R3-IGF-1、皮质醇和肝素。

优选的，所述第一诱导培养基中各成分的浓度为：FBS 15％V/V、青霉素-链霉素混合液1％V/V、L-谷氨酰胺1％V/V、B27 supplement 2％V/V、N2supplement 1％V/V、ActivinA 10ng/mL、bFGF 10ng/mL、EGF 10ng/mL、视黄酸10ng/mL、vEGF 10ng/mL、抗坏血酸50ng/mL和余量的DMEM。

优选的，所述第二诱导培养基中各成分的浓度为：FBS 15％V/V、青霉素-链霉素混合液1％V/V、L-谷氨酰胺1％V/V、B27 supplement 2％V/V、N2supplement 1％V/V、ActivinA 10ng/mL、bFGF 10ng/mL、EGF 10ng/mL、vEGF10ng/mL、抗坏血酸50ng/mL、R3-IGF-110ng/mL、皮质醇10ng/mL、肝素10ng/mL和余量的DMEM。

本发明还提供了上述技术方案所述的培养基在制备脑/神经类器官中的应用。

本发明还提供了一种脑/神经类器官，利用上述技术方案所述的培养基诱导NE-4C细胞制备得到。

本发明还提供了一种脑/神经类器官的制备方法，包括如下步骤：

依次上述技术方案所述的第一诱导培养基和第二诱导培养基对NE-4C细胞进行第一诱导和第二诱导。

优选的，所述第一诱导的时间为2d；所述第二诱导的时间为6d。

优选的，所述第一诱导和第二诱导的条件均为37℃、5％CO₂培养。

优选的，还包括所述NE-4C细胞的基础培养。