[发明专利]一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法

权利要求书

1.一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、培养诱导：

LB培养基，1mMIPTG诱导，可溶表达，诱导结束A₆₀₀＝3.498，获得湿菌；

S2、破菌：

在步骤S1中得到的湿菌中加入破菌液，冰浴超声，超声破菌后，取1ml小样，用于电泳；其余样品离心后，上清用于后续分离纯化或-20℃保存；

S3、分离纯化：

S31、疏水层析：选用丁基，辛基或苯基疏水介质，用含0.75M硫酸铵的缓冲液为平衡缓冲液，缓冲液pH7.0-9.0；上样后采用无硫酸的相同缓冲液进行梯度洗脱，所选梯度为6CV；

S32、离子交换层析：选用弱阴离子或强阴离子交换介质，进行第二步层析纯化；所需平衡缓冲液A为pH8.0，20mM Tris；洗脱缓冲液B为：pH8.0 20mM Tris+1M NaC；上样后采用梯度洗脱，洗脱条件：0-100％B，6CV洗脱；

S33、组和层析：

S331：装填DEAE FF介质的层析柱，用pH8.0，20mM Tris缓冲液进行平衡，上样后同样缓冲液进行淋洗，随后用pH8.0，20mM Tris+1M NaCl缓冲液进行洗脱，流速5ml/min，梯度洗脱，收集洗脱峰，用3M的硫酸铵调节洗峰峰电导54.2ms/cm；

S332：装填ButylFF层析柱，用pH8.0，20mM Tris+0.75M(NH₄)₂SO₄的缓冲液进行平衡，平衡后将DEAE洗脱并调节电导后的样品上样，淋洗后采用pH8.0，20mM Tris+0.3M硫酸铵，pH8.0，20mM Tris+0.2M硫酸铵，以及pH8.0，20mM Tris进行梯阶跃洗脱，收集20mM Tris+0.3M硫酸铵洗脱峰进行后续纯化；

S333、装填Superdex 75胶过滤柱，缓冲液为pH7.4，20mM PB+0.1M Na₂SO₄，将Butyl FF洗脱峰上样，收集洗脱峰为目标产品。

2.根据权利要求1所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中，共获得12.3g湿菌。

3.根据权利要求1或2所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，将12.3g湿菌中加入100ml破菌液。

4.根据权利要求3所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，破菌液包括20mM tris、1mM EDTA和2mM PMSF，破菌液的pH＝8.0。

5.根据权利要求1所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，超声功率300W，超声时工作5s，停止5s，工作4min，重复6次。

6.根据权利要求1所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，在12000rpm，4℃离心30min。

7.根据权利要求1所述的一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，破菌后溶液发黄且透亮。