[发明专利]一种病毒免提试剂及其在病毒基因组扩增中的应用

说明书

本发明公开了一种病毒免提试剂及其在病毒基因组扩增中的应用。病毒核酸免提试剂由溶剂和溶质组成；溶剂为pH7.4、10mM Tris‑HCl缓冲液；溶质及其浓度分别为0.5‑5M醋酸钾、1mM EDTA、0.01‑5% Triton X‑100、0.01‑5% tween20、2.9‑30U/mL Cellulase R‑10、3‑30U/mL Macerozyme R‑10、15‑150U/mL Pectolyase Y23和0.05‑0.1% SDS。采用该病毒核酸免提试剂扩增病毒核酸或检测病毒核酸，极大地缩短了检测时间，简化了检测步骤，能够实现快速简便的检测病毒。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种病毒免提试剂及其在病毒基因组扩增中的应用。

背景技术

病毒是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸（DNA或RNA）、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒是一种非细胞生命形态，它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。因此病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。一旦进入宿主细胞后，它就可以利用细胞中的物质和能量进行复制、转录和转译，按照自己的核酸所包含的遗传信息繁殖。

近年来病毒感染动物频繁暴发，且由于病毒潜伏期极短、爆发突然，部分病毒感染后动物不见任何临床症状而突然死亡，发病率和死亡率可高达100%，成为养殖业的最大危害，人畜共患还给人类带来了危害，甚至有些感染严重者死亡。这为日常的疾病监控预防提出要求，必须建立一种简单、快速的病毒检测方法。

早期快速简单检测病毒无疑是预防、控制病毒的前提条件。病毒分离、血清学试验至今仍是诊断病毒普遍采用的方法，但这些方法操作繁琐复杂，难以对病毒进行快速诊断，不利于病毒的防治。聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）已经成为了分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之。PCR是一种体外基因扩增技术，可以在数小时内对某段基因扩大数百万倍。该技术特异性强、敏感性高，为病毒早期快速诊断提供了敏感、快速、实用的方法。但常规PCR或荧光定量PCR检测需要提取核酸以及繁琐的试验程序，难以满足非实验室环境下现场检测的要求，且容易造成相互污染。因此，迫切需要建立一种能够快速提取病毒核酸的方法。

发明内容

本发明的目的是如何快速提取病毒核酸并进行诸如扩增一类的检测。

本发明首先保护一种病毒核酸免提试剂，可由溶剂和溶质组成；

所述溶剂可为pH7.2-7.6（如pH7.2-7.4、pH7.4-7.6、pH7.2、pH7.4或7.6）、10-100mM（如10-50mM、50-100mM、10mM、50mM或100mM）Tris-HCl缓冲液；

所述溶质及其浓度分别可为0.5-5M（如0.5-2M、2-5M、0.5M、2M或5M）醋酸钾、0.8-1.2mM（如0.8-1.0mM、1.0-1.2mM、0.8mM、1.0mM或1.2mM）EDTA、0.01-5%（如0.01-2%、2-5%、0.01%、2%或5%）Triton X-100、0.01-5%（如0.01-2%、2-5%、0.01%、2%或5%）tween20、2.9-30U/mL（如2.9-10U/mL、10-30U/mL、2.9U/mL、10U/mL或30U/mL）Cellulase R-10、3-30U/mL（如3-10U/mL、10-30U/mL、3U/mL、10U/mL或30U/mL）Macerozyme R-10、15-150U/mL（如15-75U/mL、75-150U/mL、15U/mL、75U/mL或150U/mL）Pectolyase Y23和0.05-0.1%（如0.05-0.08%、0.08-0.1%、0.05%、0.08%或0.1%）SDS。