[发明专利]一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法及雷公藤活性代谢组合物有效
| 申请号： | 202210326956.5 | 申请日： | 2022-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN114642171B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 张景红;王金海;叶龙飞;何秀枝;戴培委;欧阳静茹;杨素心 | 申请（专利权）人： | 华侨大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;A01H4/00;A01H3/04 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吴波 |
| 地址： | 362021 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 活性 雷公藤 代谢 产物 诱导 方法 组合 | ||
1.一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：将雷公藤体外体系置于含有诱导子的培养基中培养；
所述诱导子为A：2，6-二甲基-β-环糊精，B∶酵母抽提物，C∶茉莉酸甲酯和 D∶硝酸银四种组合；
所述诱导子各成分的浓度为：A：1mM-100mM，B：1g/L-100g/L，C：1mM-100mM，D：0.01mg/L-1mg/L，A∶B∶C∶D=1-4∶1-4∶1-4∶1；
所述培养基为雷公藤甲素优化培养基、生物碱优化培养基、生长素优化培养基和不定根培养基中的任意一种；
所述雷公藤甲素优化培养基包括如下成分：大量元素：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、MgSO4•7H2O 1233mg/L、KH2PO4 1360mg/L；肌醇：200 mg/L；钙盐：CaCl2•2H2O 147mg/L；铁盐：FeSO4•7H2O 9.28mg/L、Na-EDTA•2H2O 13.9mg/L；微量元素：MnSO4•7H2O 67.6mg/L、ZnSO4•2H2O 17.2mg/L、KI 3.32mg/L、CuSO4•5H2O 0.05mg/L；有机物：肌醇200mg/L、甘氨酸5mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸0.5mg/L、生物素0.5mg/L；激素：NAA 5mg/L、6-BA1.5mg/L、蔗糖40g/L；
所述生物碱优化培养基包括如下成分：大量元素：(NH4)2SO4 3960mg/L、KCl 745mg/L、MgSO4•7H2O 1233mg/L、KH2PO4 680mg/L；肌醇：200 mg/L；钙盐：CaCl2•2H2O 220mg/L；铁盐：包括硫酸铁FeSO4•7H2O 9.28mg/L、Na-EDTA•2H2O 12.42mg/L；微量元素：MnSO4•7H2O67.6mg/L、ZnSO4•2H2O 34.4mg/L、CoSO4•7H2O 0.05mg/L、CuSO4•5H2O 0.05mg/L；有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸1mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、生物素1mg/L；激素：2,4-D1mg/L、KT 0.5mg/L、蔗糖40g/L；
所述生长素优化培养基包括如下成分：大量元素NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、MgSO4•7H2O 1233mg/L、KH2PO4 1360mg/L；肌醇：200 mg/L；钙盐：CaCl2•2H2O 440mg/L；铁盐：包括FeSO4•7H2O 27.85mg/L、Na-EDTA•2H2O 37.25mg/L；微量元素：MnSO4•7H2O 33.8mg/L、ZnSO4•2H2O 8.6mg/L、H2BO3 6.2mg/L、Na2MoO4•2H2O 1mg/L、CuSO4•5H2O 0.0 25mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、甘氨酸5mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸1mg/L；激素：2,4-D 1mg/L、KT 0.5mg/L、蔗糖40g/L；
所述不定根培养基包括生长培养基和继代培养基，所述生长培养基包括如下成分：大量元素：NH4NO3 7200mg/L、KNO3 9500mg/L、MgSO4·7H2O 1850mg/L、KH2PO4 6800mg/L，钙盐：CaCl2·2H2O 1660mg/L，铁盐FeSO4·7H2O1390mg/L，Na-EDTA·2H2O 1865mg/L；微量元素H2BO3 2500mg/L、MnSO4·7H2O 6250mg/L、ZnSO4·2H2O 250mg/L、CuSO4·5H2O 6.25mg/L、Na2MoO4·2H2O 62.5mg/L，肌醇1250mg/L，有机物：甘氨酸500mg/L、盐酸硫胺素125mg/L、盐酸吡哆醇125mg/L、烟酸1250mg/L；激素：NAA 640μL/L、2.4-D 80μL/L、蔗糖30g/L、琼脂4.5g/L；
所述继代培养基包括如下成分：大量元素KNO3 800mg/L、MgSO4•7H2O 7380mg/L、KH2PO4191mg/L、Na2SO4 530mg/L；钙盐Ca（NO3）2 2870mg/L，微量元素H2BO3 357mg/L、MnSO4•7H2O1650mg/L、ZnSO4•2H2O 680.4mg/L、KI 187.5mg/L；有机物：甘氨酸750mg/L、盐酸硫胺素25mg/L、盐酸吡哆醇25mg/L、烟酸125mg/L；激素：NAA 640μL/L、2.4-D 80μL/L、蔗糖30g/L、琼脂4.5g/L；
所述培养期间使pH值保持为5.6；
所述雷公藤体外体系包括雷公藤愈伤组织细胞和雷公藤植物体外诱导的不定根；
当所述雷公藤体外体系为雷公藤愈伤组织细胞时，所述培养基为雷公藤甲素优化培养基、生物碱优化培养基和生长素优化培养基中的任意一种；当所述雷公藤体外体系为雷公藤植物体外诱导的不定根时，所述培养基为不定根培养基。
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