[发明专利]一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法及雷公藤活性代谢组合物

说明书

本发明提供了一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法及雷公藤活性代谢组合物，属于雷公藤代谢产物制备技术领域。本发明通过对培养基和诱导子种类和剂量进行了改进，显著提升了三种高附加值成分雷公藤甲素、雷公藤吉碱和雷公藤次碱的含量，且组合物成分多达122种，有了实质性的提升。本发明各种培养体系所得组合物抑制肿瘤的效果均优于雷公藤甲素，其中诱导子加雷公藤甲素优化培养基和不定根培养基组合物效果最好，72小时的ICsubgt;50/subgt;达到2.563nM，比雷公藤甲素72小时的抑制效应提升了6.89倍，而且本发明各种培养体系所得的组合物具有抑制肿瘤耐药细胞增殖的药物效应，且强于雷公藤甲素。

技术领域

本发明属于雷公藤代谢产物制备技术领域，尤其涉及一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法及雷公藤活性代谢组合物。

背景技术

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)属卫矛科植物，主产于浙江、江苏、安徽、台湾、福建等地，其中以福建泰宁地区所产的原药材质量为最优，被列为福建省道地药材，雷公藤具有抗炎、抗肿瘤、抑制免疫等药理作用，临床上主要用于治疗类风湿性关节炎(RA)及强直性脊柱炎、肾脏疾病、系统性红斑狼疮、自身免疫性疾病和皮肤病等疾病。目前已从雷公藤中分离出380多种成分，主要是二萜类、三萜类和倍半萜类生碱等。虽然，化学提取法、化学合成法、人工栽培及半合成法已经成功提取或合成得到多种雷公藤类成分单体，但是与目前对雷公藤类活性成分的需求相比，仍显得远远不足。

为解决这一问题，国内外学者建立了雷公藤植物悬浮细胞、发状根和不定根的离体培养体系，而且通过诱导子调控作用，成功的提高了雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤次碱、雷公藤吉碱等活性成分的含量，但是对雷公藤甲素的含量提升比较有限。虽然也有报道采用非生物诱导子(稀土元素等金属离子LaCl₃、一些无机化合物(水杨酸、烟酸、Ag+、β-CD)和物理胁迫因子(如紫外线)或者生物诱导子(如真菌(酵母)、细菌(苹果炭疽和柿子炭疽)、病毒、细胞壁等化学成分如(多糖(F4-30、F4-3、F4-20)、低聚糖、蛋白质(精氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、大豆蛋白)、多肽、茉莉酸甲酯(MeJA)、离子交换树脂XAD-7等对悬浮细胞体系进行调控，其中水杨酸对雷公藤甲素的诱导效应较为显著，诱导后其含量从2.81mg/L提高到5.53mg/L，提高了3.54倍；而异亮氨酸能够同时提高雷公藤次碱和吉碱的含量至4.6倍，诱导后雷公藤次碱的含量从0.21mg/L提高到0.97mg/L，而雷公藤吉碱的含量从0.29mg/L提高到1.34mg/L。(李琰.雷公藤组织培养生产次生代谢产物及其代谢调控研究[D].陕西：西北农林科技大学,2008，薛璐莎.前体和真菌诱导子对雷公藤悬浮细胞次生代谢产物合成的影响[D].陕西：西北农林科技大学,2013,朱留刚.雷公藤愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素研究[D].福建：福建农林大学,2012)。但是上述发明和研究涉及的产物包括雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和雷公藤总碱方面，这些产物的活性涉及到抗肿瘤、杀虫和免疫抑制等方面，并不涉及对肿瘤耐药方面的研究。而且申请人在先发明专利CN103159822 B中产物的总数虽有提升到七种，包括雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲、雷公藤内酯酮、雷公藤次碱、雷公藤定碱和羟基雷公藤甲素，但是其抑制肿瘤的活性局限于普通细胞，对肿瘤耐药的抑制作用较弱。

发明内容

有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种高活性雷公藤代谢产物的诱导方法，能够显著提升雷公藤甲素、雷公藤吉碱和雷公藤次碱的含量和代谢产物的种类，提高代谢产物抑制肿瘤耐药的活性。

另一个目的在于提供一种制备雷公藤活性代谢组合物的方法，能够制备获得高含量、成分种类多的雷公藤活性代谢组合物，提高雷公藤活性代谢组合物抑制肿瘤耐药的活性。

再一个目的在于提供一种雷公藤活性代谢组合物及其在制备抑制肿瘤耐药活性产品中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：