[发明专利]一种高稳定性固定化酶的制备方法

权利要求书

1.一种高稳定性固定化转氨酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）酶液制备

利用含有目标转氨酶基因的重组菌溶于缓冲液中，经破碎、离心取上清，获得浓度为4.5~9U/ml的粗酶液，备用；

2）向氨基树脂LXTE-700S中加入步骤1）获得的粗酶液，25℃，200rpm震荡混匀12h后，过滤，获得LXTE-700S@转氨酶，备用；

3）向LXTE-700S@转氨酶中加入硼酸缓冲液,再加入终浓度为2mmol/L的磷酸吡哆醛，震荡反应1h；最后加入长程交联剂和短程交联剂，37~55℃条件下震荡反应0.5~2.5h后抽滤，滤饼即为所述高稳定性固定化转氨酶；其中，长程交联剂的加入量为硼酸缓冲液体积的2-4%；短程交联剂的加入量为硼酸缓冲液体积的2-4%，

所述长程交联剂为聚乙二醇二缩水甘油醚；所述短程交联剂为丙三醇三缩水甘油醚；

所述步骤3）中LXTE-700S@转氨酶与硼酸缓冲液的质量体积比为1:10,质量体积比的单位为g/ml。

2.根据权利要求1所述高稳定性固定化转氨酶的制备方法，其特征在于，步骤2）中氨基树脂LXTE-700S与粗酶液的质量体积比为1：4，质量体积比的单位为g/ml。