[发明专利]一种富集孕妇血浆中胎儿DNA的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种富集孕妇血浆中胎儿DNA的方法，包括以下步骤：

1）抽提孕妇血液，以获得血浆DNA；

2）对所述血浆DNA进行末端补平和3’悬A，以获得3’悬A后的血浆DNA；

3）将所述3’悬A后的血浆DNA与测序接头连接，以获得连接产物；

4）将上述步骤3）得到的连接产物和磁珠预混液混匀、磁吸、吸取上清液，其中所述磁珠预混液由磁珠与磁珠稀释液按照体积比1:2-3:2混合；

5）将上述步骤4）得到的上清液与磁珠混匀、磁吸、弃去上清液；

6）对上述步骤5）保留的磁珠进行清洗和洗脱，以获得经富集的胎儿DNA；并且

其中所述步骤2）的末端补平和3’悬A在一个反应体系中进行，且所述步骤2）和3）之间不包括纯化步骤。

2.根据权利要求1所述方法，其中所述步骤4）中，所述磁珠预混液由磁珠与磁珠稀释液按照体积比1:1混合。

3.根据权利要求1所述方法，其中所述磁珠稀释液是浓度为10%-25%的PEG。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述磁珠稀释液是浓度为16%的PEG。

5.权利要求3所述的方法，其中所述PEG是PEG4000、PEG6000或PEG8000。

6.权利要求1所述的方法，其中所述磁珠预混液与上述步骤3）得到的连接产物的体积比是（0.4-0.65）:1。

7.权利要求1所述的方法，其中所述步骤5）中，磁珠与上述步骤4）得到的上清液的体积比是（0.1-0.2）:1。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述磁珠选用下组中的一种或者多种：Ampure XP磁珠、SPRIselect磁珠、KAPA Pure Beads、VAHTS® DNA Clean Beads、ProNex Beads、TIANSeq DNA片段分选磁珠和CleanNGS磁珠。

9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2）的所述末端补平采用T4 DNA聚合酶进行。

10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2）的所述3’悬A采用klenow ex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶与Taq酶的组合进行。

11.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3）的所述连接通过选自以下的一种或两种酶来进行：T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述测序接头为双链的测序接头。

13.一种富集孕妇血浆中胎儿DNA的试剂盒，包括：

1）磁珠预混液，其中所述磁珠预混液由磁珠与磁珠稀释液按照体积比1:2-3:2混合而成；

2）磁珠；和

3）用于磁珠清洗和洗脱的试剂。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述磁珠预混液由磁珠与磁珠稀释液按照体积比1:1混合而成。

15.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述磁珠稀释液为浓度为10%-25%的PEG。

16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述磁珠稀释液为浓度为16%的PEG。

17.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述PEG是PEG4000、PEG6000或PEG8000。