[发明专利]一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括幽门螺杆菌特异性核酸适配体和经AuNPs修饰的寡核苷酸探针，所述幽门螺杆菌特异性核酸适配体的核苷酸序列见SEQ ID NO：1，所述寡核苷酸探针包括探针Probe-1₂₀和Probe-2₂₀，Probe-1₂₀的5’端和Probe-2₂₀的3’端均修饰有巯基，Probe-1₂₀和Probe-2₂₀的核苷酸序列分别见SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3。

2.根据权利要求1所述的一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，其特征在于，经AuNPs修饰的寡核苷酸探针的制备方法如下：首先采用柠檬酸钠还原法制备AuNPs溶液，制备方法如下：将15mg HAuCl₄溶于51.5ml去离子水中，搅拌加热至100℃；随后加入3.5ml 1％柠檬酸钠溶液(w/v)并继续加热直至溶液由浅黄色变为暗红色，得到AuNPs溶液；

之后对寡核苷酸探针进行修饰，修饰方法如下：将20μl寡核苷酸探针与等体积的三(2-羧乙基)膦盐酸盐混合后室温孵育2小时，随后加入150μl制备好的AuNPs溶液，室温孵育4小时；将孵育后的溶液以12000rpm 4℃离心30分钟，用200μl缓冲液重悬沉淀即得，于4℃下保存备用。

3.根据权利要求2所述的一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液的组成如下：100mM NaCl，5mM KCl，50mM Tris-HCl，1mMMgCl₂，pH 7.5。

4.根据权利要求3所述的一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测方法如下：将5×5mm的粪便样本用500μl生理盐水稀释混匀后得到样本悬液，随后将5μl幽门螺杆菌特异性核酸适配体与200μl经胶体金修饰的寡核苷酸探针溶液混合，于室温下孵育10min，再加入10μl样本悬液并于室温孵育10min，最后通过肉眼观察或使用紫外分光光度计检测反应液，当反应液体系中不存在幽门螺杆菌时，反应液颜色由暗红色变为紫色，当反应液体系中存在幽门螺杆菌时，反应液颜色则为暗红色。

5.根据权利要求4所述的一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检出限为25CFU/mL。