[发明专利]一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒

说明书

本发明涉及幽门螺杆菌检测技术领域，公开了一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，所述试剂盒包括幽门螺杆菌特异性核酸适配体和经纳米金颗粒(AuNPs)修饰的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括探针Probe‑1subgt;20/subgt;和Probe‑2subgt;20/subgt;，Probe‑1subgt;20/subgt;的5’端和Probe‑2subgt;20/subgt;的3’端分别修饰有巯基(SH)。本发明通过AuNPs在聚集和解聚过程中颜色的变化，实现了对较低浓度幽门螺杆菌(25CFU/ml)的检测，且具有较良好的特异性，本发明与C13呼气检测法相比具有检测成本低、检测时间短以及不具有放射性等优点，因而有望成为临床中幽门螺杆菌感染检测的一种新手段。

技术领域

本发明涉及幽门螺杆菌检测技术领域，具体涉及一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒。

背景技术

幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性菌，其与许多消化道疾病如慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等的发生息息相关，是世界卫生组织公布的I类致癌因子。全球幽门螺杆菌感染率约为41％，而中国人群的幽门螺杆菌感染率高达59％。

目前针对幽门螺杆菌的检测方法大致可分为侵入性和非侵入性两种。非侵入性检测方法(non-invasive detection，NID)包括粪便抗原检测法(stool antigen test，SAT)、抗体检测法(antibody-based test，ABT)以及C13呼气检测法(C13-urea breath test，C13-UBT)等。其中，C13呼气检测法因高灵敏度和特异性等优点成为现阶段临床应用最广的一种幽门螺杆菌检测法。然而，C13呼气检测法的检测准确性容易受到一些因素，诸如饮食及药物等的影响。因此，急需建立一种新型的、不易受外源因素干扰的非侵入性幽门螺杆菌快速检测法，以弥补现有检测技术的不足。

近些年来，生物传感器技术领域迎来了前所未有的变革与发展，尤其是比色生物传感器技术领域。基于比色生物传感器建立的检测法具有成本低、操作简便、灵敏度及特异度高等优点。更为重要的是，比色生物传感器技术可通过颜色变化对检测结果进行直观判读，因而有望在临床快速诊断、新药评价及环境污染物监测等方面发挥重要作用。本发明旨在建立一种基于纳米金颗粒(AuNPs)的比色生物传感器检测法，通过肉眼或借助紫光吸收光谱仪判定结果，实现对粪便中幽门螺杆菌的快速检测。

发明内容

基于以上问题，本发明提供一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，本试剂盒与比色生物传感器检测技术结合具有较快的检测速度和较低的检测成本，检出限与已有方法的检出限相当甚至更优。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种基于比色生物传感器的粪样幽门螺杆菌快速检测试剂盒，所述试剂盒包括幽门螺杆菌特异性核酸适配体和经纳米金颗粒(AuNPs)修饰的寡核苷酸探针，所述幽门螺杆菌特异性核酸适配体的核苷酸序列见SEQ ID NO：1(ccaggaggaccctattctcgtgtatcgacgagatccagtg)，所述寡核苷酸探针包括探针Probe-1₂₀和Probe-2₂₀，Probe-1₂₀的5’端和Probe-2₂₀的3’端均修饰有巯基(SH)，Probe-1₂₀和Probe-2₂₀的核苷酸序列分别见SEQ ID NO：2(cgagaatagggtcctcctgg)和SEQ ID NO：3(cactggatctcgtcgataca)。

进一步的，经纳米金颗粒(AuNPs)修饰的寡核苷酸探针的制备方法如下：首先采用柠檬酸钠还原法制备AuNPs溶液，制备方法如下：将15mg HAuCl₄溶于51.5ml去离子水中，搅拌加热至100℃；随后加入3.5ml 1％柠檬酸钠溶液(w/v)并继续加热直至溶液由浅黄色变为暗红色，得到AuNPs溶液；