[发明专利]胎盘外泌体的提取方法及应用

权利要求书

1.一种胎盘外泌体的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)获取目标胎盘，清洗后加入30mM的NaHCO₃缓冲液，将胎盘剪碎成组织块；

(2)将剪碎后的组织块转入匀浆器中，在4℃条件下，点振式开启10秒，停10秒，循环3次，制得匀浆液；

(3)将匀浆液采用离心机，在4℃条件下，7000rpm离心1h，取上层清液，再于7000rpm离心0.5h，收集上清液；

(4)在4℃条件下，将上清液先用滤纸进行减压抽滤，再用0.45μm滤膜进行减压抽滤，最后使用0.22μm滤膜抽滤进行减压抽滤，收集抽滤物；

(5)在4℃条件下，将步骤(4)得到的抽滤物使用100-kDa膜包进行超滤浓缩，PBS缓冲液换液，得到浓缩液；

(6)将浓缩液进行色谱尺寸排阻，然后采用离心超滤管进行浓缩，并使用生理盐水进行换液，得到胎盘外泌体。

2.根据权利要求1所述的胎盘外泌体的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中胎盘与加入NaHCO₃缓冲液的质量比为1：4-8。

3.根据权利要求1所述的胎盘外泌体的提取方法，其特征在于：所述步骤(6)中色谱尺寸排阻具体过程为：在4℃条件下，使用PBS缓冲液平衡3个柱体积，最大流速1mL/min，使用5mL上样环进行上样，然后采用0.5mL/min流速的PBS进行洗脱，根据出峰体积进行收样，洗脱完一个柱体积之后，将峰冲平便可继续上样、洗脱。

4.根据权利要求1所述的胎盘外泌体的提取方法，其特征在于：所述PBS缓冲液的制备方法如下：称取8g的NaCl、0.2g的KCl、0.24g的KH₂PO₄、3.628g的Na₂HPO₄·12H₂O，溶于900mL纯净水中，用盐酸调PH值至7.4，加纯净水定容至1L，0.22μm滤膜过滤，高压灭菌，常温保存备用。

5.一种胎盘外泌体的应用，其特征在于：所述胎盘外泌体由权利要求1-4任一项所述的胎盘外泌体的提取方法制得，应用于抗衰老和组织修复方面。