[发明专利]胎盘外泌体的提取方法及应用

说明书

本发明公开了一种胎盘外泌体的提取方法及应用。本发明的方法包括如下步骤：胎盘组织研磨匀浆，收集匀浆液；匀浆液离心，收集上清液；上清液抽滤及超滤，获得浓缩上清液；在4℃条件下，将浓缩上清液使用100‑kDa膜包进行超滤浓缩，PBS缓冲液换液，得到浓缩液；将浓缩液进行色谱尺寸排阻，然后采用离心超滤管进行浓缩，并使用生理盐水进行换液，得到胎盘外泌体。本发明外泌体提取方法，可以获得产量高、浓缩程度高、纯度高的胎盘来源外泌体。本发明中的胎盘外泌体可作为医用敷料，用于真皮浅层及表皮的创面护理，促进创面愈合，预防疤痕形成，也可用于皮肤美容，促进皮肤细胞再生，延缓衰老，修复痘痕，淡化色斑，提亮肤色。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种胎盘外泌体的提取方法及应用。

背景技术

外泌体是细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程形成的膜性脂质小囊泡，作为天然的细胞间通讯递质，在机体的多种生理病理进程中都起到了关键作用，包括细胞间信号传导、免疫调控、干细胞生长与分化等。外泌体在各细胞间充当通讯介质的方式主要有3种：一是直接识别靶细胞表面的信号分子并与受体结合，向细胞传递信息；二是与靶细胞质膜融合后，释放所携带的内容物，实现信息传递；三是通过释放胞内的信号分子作用于靶细胞表面受体，完成信息转运。不同来源的外泌体通常具有与其来源细胞相一致的生物学功能，例如间充质干细胞来源的外泌体具有促进干细胞分化的作用，因此被用来促进组织损伤的修复。此外，间充质来源的外泌体还可以抑制前期炎症因子的表达，通过加强细胞外基质的重塑达到抗炎、抗纤维化和促进组织再生的作用。

胎盘作为生命体的起源，内含丰富的干细胞成分，其释放的外泌体除具有间充质干细胞外泌体的生物成分及作用之外，还具有更为丰富的有效成分及生物学活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种胎盘外泌体的提取方法及应用，本发明的外泌体提取方法，可以获得产量高、浓缩程度高、纯度高的胎盘来源外泌体。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种胎盘外泌体的提取方法，包括以下步骤：

(1)获取目标胎盘，清洗后加入30mM的NaHCO₃缓冲液，将胎盘剪碎成组织块；

(2)将剪碎后的组织块转入匀浆器中，在4℃条件下，点振式开启10秒，停10秒，循环3次，制得匀浆液；

(3)将匀浆液采用离心机，在4℃条件下，7000rpm离心1h，取上层清液，再于7000rpm离心0.5h，收集上清液；

(4)在4℃条件下，将上清液先用滤纸进行减压抽滤，再用0.45μm滤膜进行减压抽滤，最后使用0.22μm滤膜抽滤进行减压抽滤，收集抽滤物；

(5)在4℃条件下，将步骤(4)得到的抽滤物使用100-kDa膜包进行超滤浓缩，PBS缓冲液换液，得到浓缩液；

(6)将浓缩液进行色谱尺寸排阻，然后采用离心超滤管进行浓缩，并使用生理盐水进行换液，得到胎盘外泌体。

优选地，所述步骤(1)中胎盘与加入NaHCO₃缓冲液的质量比为1：4-8。

优选地，所述步骤(6)中色谱尺寸排阻具体过程为：在4℃条件下，使用PBS缓冲液平衡3个柱体积，最大流速1mL/min，使用5mL上样环进行上样，然后采用0.5mL/min流速的PBS进行洗脱，根据出峰体积进行收样，洗脱完一个柱体积之后，将峰冲平便可继续上样、洗脱。