[发明专利]花生组培方法和花生遗传转化方法

权利要求书

1.一种花生组培方法，其特征在于，所述花生组培方法包括：

a)将胚小叶接种至芽丛诱导培养基，培养获得愈伤组织；

b)将所述愈伤组织接种至所述芽丛诱导培养基，培养获得芽丛；

c)将所述芽丛接种至分化伸长培养基，培养获得不定芽；

d)将所述不定芽接种至生根培养基，培养获得花生再生植株；

所述芽丛诱导培养基以MS液体培养基为基础，补充加入蔗糖25～35g/L，6-BA 3.5～4.0mg/L，NAA 0.65～0.75mg/L，琼脂粉7.2～8.0g/L，pH值5.8～6.0；

所述分化伸长培养基以MS液体培养基为基础，补充加入蔗糖25～35g/L，6-BA 4.5～5mg/L，琼脂粉7.2～8.0g/L，pH值5.8～6.0；

所述生根培养基以MS液体培养基为基础，补充加入蔗糖25～35g/L，NAA 2.0～3.0mg/L，琼脂粉7.2～8.0g/L，pH值5.8～6.0。

2.根据权利要求1所述的花生组培方法，其特征在于，所述胚小叶通过如下步骤获取：

从花生膨大期的荚果中剥离种子，去掉种皮，获取幼胚；

从所述幼胚中剥离含有胚小叶的种胚；

从种胚基部处切断所述含有胚小叶的种胚，获得所述胚小叶；

优选地，所述含有胚小叶的种胚通过如下步骤获取：

1)从所述幼胚中剥离获得含有胚小叶的未处理种胚；

2)对所述含有胚小叶的未处理种胚进行消毒处理；

3)将消毒后的所述含有胚小叶的未处理种胚浸泡于灭菌水中培养孵育，获得所述含有胚小叶的种胚；

优选地，所述消毒包括依次进行的酒精消毒、HgCl₂溶液消毒以及紫外消毒；

更优选地，消毒后还包括灭菌水冲洗的步骤；

优选地，所述酒精的浓度为60～80v/v％；

优选地，所述酒精的浸泡时间为0.1～5min；

优选地，所述HgCl₂溶液的浓度为0.05～0.5wt％；

优选地，所述灭菌水冲洗包括利用灭菌水冲洗2～5次，每次冲洗3～5min；

优选地，所述培养孵育的条件为：25～30℃孵育16～18h。

3.根据权利要求1所述的花生组培方法，其特征在于，所述a)包括：在25～30℃、光照强度1500～3000Lux、光照14～18h、黑暗10～6h条件下，预培养4天，获得所述愈伤组织；

优选地，所述b)包括：在25～30℃、光照强度1500～3000Lux、光照14～18h、黑暗10～6h条件下，培养20～30天，获得所述芽丛；

优选地，所述c)包括：在25～30℃、光照强度1500～3000Lux、光照14～18h、黑暗10～6h条件下，进行伸长培养，获得长度至3cm的所述不定芽；

优选地，所述d)包括：在25～30℃、光照强度1500～3000Lux、光照14～18h、黑暗10～6h条件下，培养20～30天，获得所述花生再生植株。