[发明专利]一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法

权利要求书

1.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，去除茶皂素后，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。

2.如权利要求1所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水解是将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5-5g/mL的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶在45℃下进行水解2-3h，然后灭酶，调节pH后，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5-1h，加入的蛋白酶总量占底物质量的5-7%，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1-2:1。

3.如权利要求1或2所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述多肽溶液的浓度为20mg/mL，硫酸锌溶液的浓度为20mg/mL，多肽溶液和硫酸锌溶液的体积比为5-6:1，pH为7，螯合温度为55-65℃，螯合时间为80-100min。

4.如权利要求1-3任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述提取蛋白是将预处理油茶籽粕粉末按照料液比为1g:25-30mL加入NaOH溶液中，保持pH为9.3-10，在70℃下提取45-60min，然后离心，取上清液采用盐酸调节pH至4-4.5，再次离心得沉淀，冷冻干燥。

5.如权利要求4所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述预处理是将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75%的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末。

6.如权利要求1-5任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水浴是将多肽溶液pH调节至7，然后在45℃下进行水浴30-40min。

7.如权利要求6所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述超声处理的超声功率为100%，超声处理时间为15min。

8.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：

步骤1：提取油茶籽粕蛋白

（1）预处理：将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75%的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末；

（2）：将油茶籽粕粉末加入pH为9.3-10的氢氧化钠溶液中，在70℃下水浴提取45-60min，然后在8000rpm下离心20min，取上清液加入1mol/L的盐酸溶液，调节pH至4-4.5，再在8000rpm下离心20min，取沉淀进行冷却干燥，得油茶籽粕蛋白，油茶籽粕和氢氧化钠溶液的用量比为1g：25-30mL；

步骤2：水解制备多肽

（1）使用NKA-Ⅱ树脂对油茶籽粕粗蛋白中茶皂素成分进行吸附，具体是将NKA-Ⅱ树脂经去离子水充分浸泡溶胀后，装填于内径为12cm，长度为25cm的层析柱中，将浓度为20mg/mL油茶籽粕粗蛋白提取物溶液通过层析柱，流速为100mL/h，吸附完成后的蛋白提取液颜色变浅，呈微黄色；

（2）将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5-5mg/L的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶，在45℃下水解2-3h，然后灭酶，调节pH至8-8.5，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5-1h，加入的蛋白酶总量占蛋白质量的5-7%，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1-2:1；

采用截留分子量为3KDa的超滤膜对油茶籽粕蛋白水解液进行分离，控制蠕动泵转速为30-40rpm，超滤膜出口压力为5.00Bar，收集过滤物，进行冷冻干燥；

步骤3：水浴及超声处理

将步骤2制备的多肽溶于水配制成浓度为20mg/L的多肽溶液，硫酸锌配制成20mg/L的硫酸锌溶液，调节多肽溶液的pH为7，在45℃下水浴30-40min，然后在超声功率为100%下超声处理15min；

步骤4：螯合

超声处理结束后，将硫酸溶液加入多肽溶液中，在55-65℃下反应80-100min，然后用无水乙醇洗涤，离心取沉淀，冷冻干燥，得油茶籽粕多肽锌螯合物，多肽溶液和硫酸锌溶液的质量比为5-6:1。