[发明专利]一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法

说明书

一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，是以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。本发明制备的油茶籽粕多肽锌螯合物中含有17种氨基酸，其中具有7种必须氨基酸，油茶籽粕多肽与锌离子螯合率达到58.79%；具有优异的抗氧化能力，清除DPPH自由基能力达到97.4%，具有较好的生物活性，油茶籽粕多肽锌螯合物中锌离子释放率达到78.23%，透析率达到60.51%，具有较好的生物利用率。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法。

背景技术

油茶籽粕(Camellia oleifera seed meal，COSM)是油茶籽提油后产生的一种副产物，但大部分的油茶籽粕资源被浪费，没有发挥其真正的价值。油茶籽粕中含有蛋白质10％～20％、粗脂肪0.5％～7％、粗纤维15％～25％、糖类30％～60％、茶皂素10％～14％等，油茶籽粕中糖类、粗蛋白、粗纤维等物质，能广泛应用于生物饲料、化工、轻工等行业。油茶籽粕中除丰富的茶皂素和多糖外，其中的蛋白含量也很丰富，含有18种氨基酸，且含有动物必需的10种氨基酸，但是由于其中含有大量具有溶血毒性的茶皂素，且茶皂素很难去除，制约了油茶籽粕中蛋白的应用，目前只在燃料，有机肥和一些禽畜饲料上有应用，有的甚至直接被当做垃圾丢掉，不仅没有对其进行充分利用，还给环境带来巨大负担。因此有效利用开发其副产物具有一定的实际意义。

锌作为人体必须的微量矿物质元素之一，被称为“生命元素”。其在维持人体正常的生命活动中起着重要作用，缺锌会使人的身体健康受到很大的影响，如儿童缺锌会对其生长发育造成影响，成人缺锌对其免疫功能，神经系统都有很大的影响。可见人体对补充吸收锌的重要性。人体对于锌的补充可通过摄入富锌食物或者是服用补锌剂。目前的补锌剂已经发展至第四代，为多肽螯合锌，是多肽与锌的结合物。

发明内容

本发明目的在于提供一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法。

本发明目的通过如下技术方案实现：

一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，去除茶皂素后，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。

进一步，上述去除茶皂素是使用NKA-Ⅱ树脂对油茶籽粕粗蛋白中茶皂素成分进行吸附，具体是将NKA-Ⅱ树脂经去离子水充分浸泡溶胀后，装填于内径为12cm，长度为25cm的层析柱中，将浓度为20mg/mL油茶籽粕粗蛋白提取物溶液通过层析柱，流速为100mL/h，吸附完成后的蛋白提取液颜色变浅，呈微黄色。

在试验过程中发现，油茶籽粕多肽存在与锌离子螯合率较低的难点，且由于油茶籽粕中含有大量茶皂素，在提取蛋白时，茶皂素也被一起提取，导致提取的蛋白呈黑色，不仅色泽观感差，且大量的茶皂素的存在对人体危害较大。但是在去除茶皂素之后，水解形成多肽与锌离子螯合率较未去除茶皂素之前更低，且螯合后，生物活性下降。

本发明中采用对于油茶籽粕蛋白具有高水解度的风味蛋白酶优先降解，然后再采用对油茶籽粕具有较低水解度的胰蛋白酶继续水解，通过复合水解获得多肽的氨基酸组成和序列中，具有更多的与锌离子具有较强结合能力的氨基酸，同时也调节了多肽表面的亲水基团数量及分布，引起了多肽表面局部电荷密度变化，增强了其与锌离子的结合能力，从而提高了油茶籽粕多肽与锌离子的螯合能力。

进一步，上述水解是将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5-5g/mL的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶在45℃下进行水解2-3h，然后灭酶，调节pH后，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5-1h，加入的蛋白酶总量占底物质量的5-7％，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1-2:1。