[发明专利]一种猪轮状病毒特异性阳性血清及其制备方法

说明书

本发明针对兽用生物制品标准物质短缺问题，提供了一种猪轮状病毒特异性阳性血清及其制备方法，通过该方法制备的阳性血清中和效价高，能解决目前兽用生物制品外源病毒检验时猪轮状病毒活疫苗中和不完全的问题；且纯净性好，不含有其他猪常见病原；特异性好，不含有除猪轮状病毒抗体外的其他猪常见病原抗体，能够解决长期困扰猪轮状病毒活疫苗单苗以及联苗的质量控制的瓶颈问题。此外，猪轮状病毒阳性血清是目前主要应用于鉴别、检验、诊断的蛋白类物质，在清除细菌和病毒中起着重要的作用，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

技术领域

本发明属于兽医生物技术和动物病毒学领域，具体涉及一种猪轮状病毒特异性阳性血清及其制备方法。

背景技术

猪轮状病毒(Porcine Rotavirus，PoRV)为无囊膜的双链RNA病毒，属于呼肠孤病毒科 (Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus)。猪轮状病毒感染引起的仔猪病毒性腹泻主要症状为仔猪呕吐、厌食、脱水、腹泻和死亡等。由猪轮状病毒所引起的感染无论是单独感染或者混合感染在猪群中均普遍存在，由此造成仔猪的发病甚至死亡给猪养殖业造成了巨大的经济损失。尤其近两年来，全国各地规模化猪场轮状病毒检出率直线上升，与猪流行腹泻病毒混合感染，给国内的养猪业带来了巨大的经济损失。

目前没有特效的药物用来治疗由猪轮状病毒感染引起的疾病，因此做好对猪轮状病毒感染的预防尤为重要，接种疫苗能够对于猪轮状病毒的防控具有十分重要的意义。目前，猪轮状病毒活疫苗以联苗的形式应用广泛，在兽用生物制品制造的过程中，需要采用多种生物性原材料，如血清、胰酶和细胞等，这些材料很容易受到外源因子的污染，且这些外源因子的不确定性也给检验带来了极大的困难。目前按照现行《中国兽药典》的规定，猪轮状病毒活疫苗单苗以及联苗均需要进行外源病毒检验。检验时需采用特异性血清对疫苗毒进行中和，检验过程中低效价的猪轮状病毒血清不能完全中和疫苗毒以及种毒，严重影响产品的质量检验。

目前还未有猪轮状病毒相关阳性血清制备方法的相关报道。现有技术仅公布了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清及其制备方法(申请号为202011029500.X)。

发明内容

本发明针对兽用生物制品标准物质短缺问题，提供了一种猪轮状病毒特异性阳性血清的制备方法，通过该方法制备的阳性血清中和效价高，能解决目前兽用生物制品外源病毒检验时猪轮状病毒活疫苗中和不完全的问题；且纯净性好，不含有其他猪常见病原；特异性好，不含有除猪轮状病毒抗体外的其他猪常见病原抗体，能够解决长期困扰猪轮状病毒活疫苗单苗以及联苗的质量控制的瓶颈问题。此外，猪轮状病毒阳性血清是目前主要应用于鉴别、检验、诊断的蛋白类物质，在清除细菌和病毒中起着重要的作用，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

本发明的技术方案是：一种猪轮状病毒特异性阳性血清的制备方法，包括以下步骤：

(1)选用满足条件的兔：体重2.25-3.5kg，符合国家规定的清洁级实验动物，且其不带有病原体及其抗体，病原体包括杂菌、支原体、牛病毒性腹泻病毒、猪流行腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒中的任一种或多种的组合；

(2)免疫原制备：制备猪轮状病毒的病毒液，取上清液经无菌检验、无支原体检验、鉴别检验和外源病毒检验合格，且病毒含量不低于10^7.5TCID₅₀/mL作为活免疫原；

将活免疫抗原，作为灭活免疫原；

(3)免疫接种：分别对每只兔进行5次免疫接种：

第一次免疫接种：对每只兔颈部肌肉注射按1：1混合的2ml的活免疫原和弗氏完全佐剂；

中间4次免疫接种：第一次免疫接种后每隔14天分别对每只兔进行颈部肌肉注射按1： 1混合的2ml的灭活免疫原和弗氏不完全佐剂；