[发明专利]一种用于建鲤2号鉴定的分子标记、鉴定方法及应用

权利要求书

1.一种建鲤2号鉴定的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合包括13个SNP分子标记，依次为第1-13SNP分子标记，待测建鲤含有13个SNP分子标记中7个以上SNP分子标记即为建鲤2号。

2.根据权利要求1所述的分子标记组合，其特征在于，

第1SNP分子标记为碱基CC，所述SNP标记位于核酸的第30位，所述第1SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

第2SNP分子标记为碱基CC，所述SNP标记位于核酸的第386位，所述核酸具有如SEQ IDNO：2所示核苷酸序列；

第3SNP分子标记为碱基CC，所述SNP标记位于核酸的第450位，所述核酸具有如SEQ IDNO：3所示核苷酸序列；

第4SNP分子标记为碱基GG，所述SNP标记位于核酸的第159位，所述核酸具有如SEQ IDNO：4所示核苷酸序列；

第5SNP分子标记为碱基GG，所述SNP标记位于核酸的第30位，所述核酸具有如SEQ IDNO：5所示核苷酸序列；

第6SNP分子标记为碱基CC，所述SNP标记位于核酸的第511位，所述核酸具有如SEQ IDNO：6所示核苷酸序列；

第7SNP分子标记为碱基AA，所述SNP标记位于核酸的第43位，所述核酸具有如SEQ IDNO：7所示核苷酸序列；

第8SNP分子标记为碱基GG，所述SNP标记位于核酸的第361位，所述核酸具有如SEQ IDNO：8所示核苷酸序列；

第9SNP分子标记为碱基AA，所述SNP标记位于核酸的第212位，所述核酸具有如SEQ IDNO：9所示核苷酸序列；

第10SNP分子标记为碱基AA，所述SNP标记位于核酸的第19位，所述核酸具有如SEQ IDNO：10所示核苷酸序列；

第11SNP分子标记为碱基AA，所述SNP标记位于核酸的第126位，所述核酸具有如SEQ IDNO：11所示核苷酸序列；

第12SNP分子标记为碱基GG，所述SNP标记位于核酸的第99位，所述核酸具有如SEQ IDNO：12所示核苷酸序列；

第13SNP分子标记为碱基CC，所述SNP标记位于核酸的第487位，所述核酸具有如SEQ IDNO：13所示核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的分子标记组合，其特征在于，所述13个SNP分子标记的引物序列依次为：第1-13SNP分子标记的正向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：14～26所示；第1-13SNP分子标记的反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：27～39所示。

4.一种利用权利要求1-3任一项所述的分子标记组合进行建鲤2号鉴定的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)筛选、设计引物；

(2)提取待测建鲤样本的基因组DNA；

(3)PCR扩增：运用PCR仪扩增提取的待测建鲤样本的基因组DNA；

(4)酶切、电泳检测：对PCR扩增产物进行酶切，并用电泳分离检测；

(5)根据电泳条带，分析基因型，获得每个待测建鲤样本的多个SNP分子标记位点的基因型，待测建鲤样本含有7个以上权利要求1所述13个SNP分子标记即为建鲤2号。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，取待测建鲤样本尾部鳍条少量，加入到450ul 1×STE的1.5ml离心管中，同时加入10ul20mg/ml蛋白酶K和12.5ul 20％十二烷基硫酸钠，混匀，置于55℃水浴消化过夜，然后采取酚氯仿法提取DNA，加200ul去离子水溶解后，4℃保存备用。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述PCR扩增的反应体系为：PCR反应总体积为15μL，其中30ng/μL DNA模板2μL，2×Taq PCR Mix 5μL，10μmol/L正向和反向引物各0.5μL，去离子水7μL。