[发明专利]一种家用型宫颈癌筛查试剂卡

权利要求书

1.一种家用型宫颈癌筛查试剂卡，包括底板、样品垫、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于：所述检测线包括p16检测线和ki-67检测线，所述p16检测线、ki-67检测线和质控线彼此平行，所述p16检测线和ki-67检测线分别通过将p16点膜抗体的溶液和ki-67点膜抗体的溶液喷点在硝酸纤维素膜上获得；

所述的家用型宫颈癌筛查试剂卡采用如下方法制备而成：

蓝色乳胶颗粒标记生物素；

红色乳胶颗粒标记p16标记抗体和ki-67标记抗体；

乳胶结合垫的制备；

硝酸纤维素膜的制备；

样品垫的制备；

试剂卡的组装；

样本处理液的制备；

所述硝酸纤维素膜的制备步骤包括：

硝酸纤维素膜的封闭：配制膜封闭液，将硝酸纤维素膜浸泡于膜封闭液中2小时，37℃烘干2小时，密封好置于室温备用；

抗体稀释和喷点：配制检测线稀释液，用PBS将链霉亲和素稀释至2 mg/mL，用检测线稀释液分别将p16点膜抗体、ki-67点膜抗体进行稀释，p16点膜抗体稀释至0.3 mg/mL，ki-67点膜抗体稀释至0.3 mg/mL；用点膜机分别将以上稀释后的链霉亲和素和点膜抗体喷点在封闭后的硝酸纤维素膜上的质控区和测试区的p16、ki-67位置，得到质控线、p16检测线和ki-67检测线，37℃烘干3小时，密封好置于室温备用；

所述膜封闭液包括：4-8 g/L的Tris、1-3 g/L的BSA、4-8 g/L的聚乙烯吡咯烷酮和20-30 g/L的蔗糖；

所述检测线稀释液包括：0.01M的PBS、2-3 g/L的聚乙烯醇、2-3 mg/L的吐温-20、175-195 mg/L的EDTA和12-18 g/L的海藻糖。

2.如权利要求1所述的家用型宫颈癌筛查试剂卡，其特征在于：所述蓝色乳胶颗粒标记生物素的步骤具体为：用PBS把蓝色乳胶颗粒稀释成1%的终浓度，加入生物素使其终浓度为0.1mg/mL，4℃反应过夜；加入浓度为1%的BSA封闭1h，离心，去上清，沉淀用含0.1% BSA的PBS复溶，置于4℃备用。

3.如权利要求1所述的家用型宫颈癌筛查试剂卡，其特征在于：所述红色乳胶颗粒标记p16标记抗体和ki-67标记抗体的步骤包括：

红色乳胶颗粒标记p16标记抗体：用PBS把红色乳胶颗粒稀释成1%的终浓度，加入p16标记抗体使其终浓度为0.5 mg/mL，4℃反应过夜；加入浓度为1%的BSA封闭1h，离心，去上清，沉淀用含0.1%BSA的PBS复溶，置于4℃备用；

红色乳胶颗粒标记ki-67标记抗体：用PBS把红色乳胶颗粒稀释成1%的终浓度，加入ki-67标记抗体使其终浓度为0.5 mg/mL，4℃反应过夜；加入浓度为1%的BSA封闭1h，离心，去上清，沉淀用含0.1%BSA的PBS复溶，置于4℃备用。

4.如权利要求1所述的家用型宫颈癌筛查试剂卡，其特征在于：所述乳胶结合垫的制备步骤包括：

p16乳胶结合垫的制备：用含0.1%BSA的PBS将蓝色乳胶颗粒标记生物素和红色乳胶颗粒标记p16标记抗体按一定比例混合稀释，分别将蓝色乳胶颗粒稀释成0.2%的终浓度，将红色乳胶颗粒稀释成0.2 %的终浓度，用机器喷点在聚酯膜上，37℃烘干3小时，密封好置于室温备用；

ki-67乳胶结合垫的制备：用含0.1%BSA的PBS将蓝色乳胶颗粒标记生物素和红色乳胶颗粒标记ki-67标记抗体按一定比例混合稀释，蓝色乳胶颗粒稀释成0.2%的终浓度，红色乳胶颗粒稀释成0.2 %的终浓度，用机器喷点在聚酯膜上，37℃烘干3小时，密封好置于室温备用。

5.如权利要求1所述的家用型宫颈癌筛查试剂卡，其特征在于：所述膜封闭液包括：5g/L的Tris、1.5 g/L的BSA、5 g/L的聚乙烯吡咯烷酮和25g/L的蔗糖；

所述检测线稀释液包括：0.01M的PBS、2.5 g/L的聚乙烯醇、2.5 mg/L的吐温-20、186mg/L的EDTA和15 g/L的海藻糖。