[发明专利]一种用于毛花猕猴桃赣猕6号品种鉴定的分子标记引物及开发和应用方法在审
| 申请号： | 202210379080.0 | 申请日： | 2022-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN114807415A | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 廖光联;徐小彪;黄春辉;钟敏;曲雪艳;贾东峰;刘青 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6811;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 江西省专利事务所 36100 | 代理人： | 殷勇刚 |
| 地址： | 330045 江西省南昌*** | 国省代码： | 江西;36 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 猕猴桃 品种 鉴定 分子 标记 引物 开发 应用 方法 | ||
1.一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物，其特征在于，所述分子标记命名为EST-Ad42，EST-Ad42分子标记包括两个引物，分别为分子标记引物EST-Ad42-F和分子标记引物EST-Ad42-R，所述分子标记引物EST-Ad42-F结构为gttaatttgatcgggatgg，所述分子标记引物EST-Ad42-R结构为gaggagcttgagctgctat，退火温度为62℃。
2.一种权利要求1所述分子标记引物的开发方法，其步骤包括，
（1）从NCBI db EST数据库下载所有的猕猴桃EST序列，并利用SSR Hunter1.3软件，对所有下载的EST序列进行SSR筛查；
（2）SSR筛查的标准是：二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸，最少重复次数分别为7次、5次、4次、4次、3次，获得中间序列；
（3）应用Primer 5.0软件设计猕猴桃EST-SSR引物；
（4）利用设计合成的引物，对毛花猕猴桃“赣猕6号”品种进行PCR扩增，筛选得到分子标记EST-Ad42，EST-Ad42分子标记包括两个引物，分别为分子标记引物EST-Ad42-F和分子标记引物EST-Ad42-R，所述分子标记引物EST-Ad42-F结构为gttaatttgatcgggatgg，所述分子标记引物EST-Ad42-R结构为gaggagcttgagctgctat，退火温度为62℃。
3.如权利要求2所述开发方法，其特征在于，步骤（3）中，猕猴桃EST-SSR引物的设计方法为，选取步骤（2）获得的中间序列200-300bp，输入Primer 5.0软件进行设计，设计参数为：引物序列22±2bp，产物大小150-200bp，引物GC含量40-55%，退火温度50-65℃。
4.一种权利要求1所述分子标记引物的应用方法，其特征在于，
利用权利要求1所述分子标记引物EST-Ad42-F和分子标记引物EST-Ad42-R对“赣猕6号”及“华特”、“赣绿1号”、“赣绿2号”等已报道品种的DNA进行扩增，使用8 w/v%丙烯酰胺凝胶进行检测，硝酸银染色显影，凝胶图谱中的每一条带作为一个分子标记，每条多态性带可视为一个等位基因，根据各分子标记的迁移率及其有无计算所有位点的二元数据，有带记为“1”，无带记为“0”，根据不同条带的大小和数目绘制成1/0矩阵，构建成特异性分子身份证，通过特异性分子身份证鉴定“赣猕6号”。
5.如权利要求4所述应用方法，其特征在于，通过特异性分子身份证，对“华特”、“赣绿1号”、“赣绿2号”进行区分。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江西农业大学，未经江西农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202210379080.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种新型真空断路器
- 下一篇：一种被用于无线通信的节点中的方法和装置
