[发明专利]一种用于毛花猕猴桃赣猕6号品种鉴定的分子标记引物及开发和应用方法

说明书

本发明公开了一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物，所述分子标记命名为EST‑Ad42，EST‑Ad42分子标记包括分子标记引物EST‑Ad42‑F和分子标记引物EST‑Ad42‑R，所述分子标记引物EST‑Ad42‑F结构为gttaatttgatcgggatgg，所述分子标记引物EST‑Ad42‑R结构为gaggagcttgagctgctat，退火温度为62℃。本发明要解决的另一个问题是于提供一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物的开发方法和应用方法。本发明分子标记引物特异性高，利用分子标记EST‑Ad42引物对DNA进行扩增，构建特异性的DNA分子身份证。

技术领域

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，具体涉及用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物。本发明还涉及用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物的开发和应用方法。

背景技术

猕猴桃是原产于中国的猕猴桃科猕猴桃属的特色浆果树，果实营养密度较高，花色多样极具观赏性，是鲜食与观赏兼备的多年生落叶藤本果树。目前，全世界共有猕猴桃属植物54个种及21个变种。猕猴桃的鲜果富含抗坏血酸和氨基酸，目前市场上主要以鲜食为主，也可加工成果脯、果酒、果汁等，均具有独特的风味，因此深受大众青睐。毛花猕猴桃为中国特有的猕猴桃属中的一个重要种类，广泛分布于浙江、福建、江西、湖南、广西、广东和贵州等地，是继中华猕猴桃和美味猕猴桃之后极具开发潜力的特色浆果，野生种质资源十分丰富。由于毛花猕猴桃分布范围狭小、均为二倍体、基因保守等因素，在外观形态上毛花猕猴桃表现出一致性较高。通过传统的观察树势、叶片形态、物候期、果实形状、花器官颜色等难以区分。猕猴桃种植区的频繁引种，更使得猕猴桃品种较混杂，普遍存在同名异物和同物异名现象。

利用分子标记技术鉴别品种已成为目前最为高效、精准且不易受环境影响的一种手段，分子标记技术已在柑橘、石榴、葡萄、桃上一些研究，可以利用其进行亲缘关系分析、种质鉴定等。其中SSR分子标记技术应用最为广泛，利用SSR进行分子身份证的构建已在许多物种上取得了成功，分子身份证构建不仅可以鉴别亲缘关系相近的种质，对于知识产权的保护也是十分重要的手段。

“赣猕6号”系从野生毛花猕猴桃自然变异群体中选育而成的品种。果实长圆柱形，果面密被白色短茸毛。果实中大，平均单果质量72.5g。果肉墨绿，可溶性固形物含量13.6%，可滴定酸含量0.87%，干物质含量为17.3%，抗坏血酸含量7.23 mg/g，果实成熟期为10月下旬。果实后熟达食用状态时易剥皮，肉质细嫩清香，风味酸甜适度。通过开发适用于毛花猕猴桃“赣猕6号”的分子标记，有利于从分子水平鉴定品种，更有利于知识产权的保护。

发明内容

本发明的目的在于利用分子标记技术，提供一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物。本发明的另外一个目的在于提供该分子标记引物在猕猴桃品种鉴定中的开发和应用方法。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物，其特征在于，所述分子标记命名为EST-Ad42，EST-Ad42分子标记包括两个引物，分别为分子标记引物EST-Ad42-F和分子标记引物EST-Ad42-R，所述分子标记引物EST-Ad42-F结构为gttaatttgatcgggatgg，所述分子标记引物EST-Ad42-R结构为gaggagcttgagctgctat，退火温度为62℃。

本发明要解决的另一个问题是于提供一种用于毛花猕猴桃“赣猕6号”品种鉴定的分子标记引物的开发方法，其步骤包括，

（1）从NCBI db EST数据库下载所有的猕猴桃EST序列，并利用SSR Hunter1.3软件，对所有下载的EST序列进行SSR筛查；

（2）SSR筛查的标准是：二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸，最少重复次数分别为7次、5次、4次、4次、3次，获得中间序列；

（3）应用Primer 5.0软件设计猕猴桃EST-SSR引物；