[发明专利]前列腺癌代谢组学标志物及其筛选方法

权利要求书

1.前列腺癌代谢组学标志物，其特征在于：由血液经高丰度蛋白去除处理后，用沉降剂纯化，再进行荧光染色与双向凝胶电泳得到；

所述的沉降剂由如下步骤制成：

步骤A1：将壳聚糖、异丙醇、氢氧化钠、去离子水混合搅拌后，加入一氯乙酸，继续反应，加入乙醇水溶液终止反应，并调节反应液pH值，过滤去除滤液，将滤饼用乙醇溶液洗涤，再将滤饼溶于去离子水中，加入盐酸至产生白色絮状沉淀，将沉淀物洗涤并烘干，制得羧甲基壳聚糖；

步骤A2：将正硅酸乙酯、去离子水、盐酸混合搅拌后，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，继续反应，过滤去除滤液，将滤饼分散在去离子水中，加入羧甲基壳聚糖和1-羟基苯并三唑，回流反应，制得改性壳聚糖；

步骤A3：将氯化铝、氯化铁、去离子水混合搅拌并入氢氧化钠溶液，升温继续搅拌后，降温保温，加入改性壳聚糖，超声处理，制得复合壳聚糖；

步骤A4：将复合壳聚糖加入淀粉液中，进行搅拌并通入氮气除氧，加入丙烯酰胺和碳酸二甲酯，混合均匀后，加入过硫酸钾溶液，进行反应后，加入乙醇至沉淀析出，将沉淀干燥，制得沉降剂。

2.根据权利要求1所述的前列腺癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A1所述的壳聚糖、异丙醇、氢氧化钠、去离子水、一氯乙酸的用量比为1g:12mL:4.5g:25mL:25mL。

3.根据权利要求1所述的前列腺癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A2所述的正硅酸乙酯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、羧甲基壳聚糖的用量比为0.1mol:0.06mol:10g。

4.根据权利要求1所述的前列腺癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A3所述的氯化铝、氯化铁、氢氧化钠溶液、改性壳聚糖的用量比为9g:1g:20mL:6g。

5.根据权利要求1所述的前列腺癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A4所述的复合壳聚糖、淀粉液、丙烯酰胺、碳酸二甲酯的用量质量比为2:3:9:2，过硫酸钾的用量为丙烯酰胺用量的0.5％。

6.根据权利要求1所述的前列腺癌代谢组学标志物的筛选方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

步骤S1：将蓝色medium介质摇匀，进行离心，去除上清，将底物加入平衡液，继续离心，去除上清，将底物加入平衡液，继续离心，去除上清，将底物和血浆混合均匀，孵育后，离心，将上清液继续孵育，再次进离心，取上清保温得到第一样品，将底物加入平衡液中，再次离心，取上清保温得到第二样品，将第一样品和第二样品混合，得到蛋白样品；

步骤S2：将蛋白样品和沉降剂混合均匀，冰水浴中保温后，离心，去除上清，将底物分散在去离子水中，加入裂解液，保温，再离心，去除上清，将底物、尿素、硫脲、三羟甲基氨基甲烷、CHAPS混合重溶后，进行离心，取上清冻存，得到冻干样本；

步骤S3：将冻干样本进行荧光染色，并在避光条件下进行双向凝胶电泳，得到前列腺癌代谢组学标志物。