[发明专利]前列腺癌代谢组学标志物及其筛选方法

说明书

本发明公开了前列腺癌代谢组学标志物及其筛选方法，由血液经高丰度蛋白去除处理后，用沉降剂纯化，再进行荧光染色与双向凝胶电泳得到前列腺癌代谢组学标志物，通过羧甲基壳聚糖上的羧基与二氧化硅表面的氨基发生脱水缩合，制得改性壳聚糖，再将氯化铝和氯化铁进行水解聚合，再用改性壳聚糖作为载体，进行负载，制得复合壳聚糖，将复合壳聚糖与淀粉共混后，与丙烯酰胺共聚物接枝，制得沉降剂，该沉降剂与传统沉降剂相比能够更快速的将血浆中的杂质进行吸附形成不溶沉淀，进而提升了血浆蛋白纯化的效率，避免了杂质影响列腺癌代谢组学标志物筛选的准确性。

技术领域

本发明涉及代谢组学标志物筛选技术领域，具体涉及前列腺癌代谢组学标志物及其筛选方法。

背景技术

前列腺癌是老年男性人群中的一种常见恶性肿瘤，据最新统计，2018年全球有近130万新发病例和35.9万死亡病例，其发病率占男性恶性肿瘤的13.5％，仅次于肺癌，高居第2位，死亡率占男性恶性肿瘤的6.7％，高居第5位。代谢组学是系统生物学中相对新兴的学科，是一个以研究细胞、组织或器官生物代谢后产生的代谢产物为研究目的科学领域。由于代谢产物相对稳定的存在于体液内，因此近年来内源性代谢谱分析更多的应用于肿瘤的早期诊断研究，而前列腺癌癌则是通过尿液或血液中代谢组学标志物进行诊断。

传统的血液代谢组学标志物筛选通过对代谢组学标志物蛋白质进行凝胶电泳，获得血浆差异表达蛋白质，以此来诊断前列腺癌，在血浆蛋白质处理过程中会使用沉降剂对血浆进行杂质处理，现有的沉降剂需要进行多次沉降，严重影响了前列腺癌诊断效率。

发明内容

本发明的目的在于提供前列腺癌代谢组学标志物及其筛选方法，由血液经高丰度蛋白去除处理后，用沉降剂纯化，再进行荧光染色与双向凝胶电泳得到，通过沉降剂将血浆中的杂质进行吸附形成不溶沉淀，解决了传统沉降剂沉降效率低且沉降不彻底的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种前列腺癌代谢组学标志物，由血液经高丰度蛋白去除处理后，用沉降剂纯化，再进行荧光染色与双向凝胶电泳得到前列腺癌代谢组学标志物。

该前列腺癌代谢组学标志物由如下步骤筛选：

步骤S1：将蓝色medium介质摇匀，在转速为10000r/min的条件下，进行离心5-10s，去除上清，将底物加入平衡液，继续离心5-10s，去除上清，将底物加入平衡液，继续离心20-40s，去除上清，将底物和血浆混合均匀，在温度为20-25℃的条件下，孵育5-10min后，在转速为10000-12000r/min的条件下，离心60s，将上清液继续孵育5-10min，再次进离心，取上清保温得到第一样品，将底物加入平衡液中，再次离心，取上清保温得到第二样品，将第一样品和第二样品混合，得到蛋白样品；

步骤S2：将蛋白样品和沉降剂混合均匀，冰水浴中保温20-30min后，在温度为3-5℃，转速为8000-8500r/min的条件下，离心5-8min后，去除上清，将底物分散在去离子水中，加入裂解液，在温度为零下20-25℃的条件下，保温5-7天后，在温度为3-5℃，转速为8000-8500r/min的条件下，离心5-8min，去除上清，将底物、尿素、硫脲、三羟甲基氨基甲烷、CHAPS混合重溶后，在温度为3-5℃，转速为12000-12500r/min的条件下，进行离心，取上清冻存，得到冻干样本；

步骤S3：将冻干样本进行荧光染色，并在避光条件下进行双向凝胶电泳，得到前列腺癌代谢组学标志物。

进一步，所述的平衡液为尿素、三羟甲基氨基甲烷、甘油、SDS、溴酚蓝、碘乙酰胺以用量比6mol:75mmol:300mL:20mL:0.02mL:25g混合。

进一步，所述的沉降剂由如下步骤制成：