[发明专利]一种用于检测对硝基酚的试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种用于检测对硝基酚的试纸条及其制备方法与应用，试纸条包括试纸基体，设置在试纸基体上的E.coli BL21菌株，E.coli BL21菌株携带有pPNP‑LacZ质粒，pPNP‑LacZ质粒的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示，pPNP‑LacZ质粒的物理图谱如图1所示。当试纸条与含有对硝基酚的待检测液接触时，对硝基酚与pPNP‑LacZ质粒中的阻遏蛋白pobR的结合消除了pobR与操纵基因位点pobO的结合，转录反方向的β半乳糖苷酶基因，产生β‑半乳糖苷酶，当向待检测液中加入β‑半乳糖苷酶显色底物时，产生的β‑半乳糖苷酶可降解β‑半乳糖苷酶显色底物而产生颜色，对硝基酚浓度不同产生的颜色强度不同，进而可检测待检测液中对硝基酚的浓度。本发明提供的试纸条便于携带、成本低，用于检测对硝基酚时简便、快速、直观、准确。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测对硝基酚的试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

对硝基酚(p-NP)是一类用途广泛的化工原料和药物中间体，主要用于生产合成医药、染料、有机磷农药及工业溶剂。其在自然环境中半衰期较长，对生态环境造成威胁，被认定为环境内分泌干扰物。

通用的化学分析方法能准确定量分析污染物中主要成分的含量，如高效液相色谱法(HPLC)和新型快速检测法(新型纳米材料的传感器)。但现有方法不能直接并及时地反映各种有毒物质(如对硝基酚)在复杂环境介质中对生物的综合影响(即有毒物质的生物可利用性)。全细胞细菌生物传感器因其独特的生理特性，与现代光电检测手段完美匹配的特点而倍受关注。试纸以其检测成本低、操作简单等独特的特点在各个领域中应用广泛，例如：实验室所用的pH试纸、淀粉碘化钾试纸；工业所用的温度热敏试纸、废水检测试纸；生活所用的血糖试纸等。由于制作试纸的材料和方法不同，试纸的检测领域和检测灵敏度也不同。目前，尚未有研究利用全细胞生物传感器制备试纸条用来检测土壤中的对硝基酚。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于尚未有研究利用全细胞生物传感器制备试纸条用于检测土壤中对硝基酚的问题，本发明的目的在于提供一种用于检测对硝基酚的试纸条及其制备方法与应用，用以简便、快速、直观、准确地检测土壤中对硝基酚。

本发明的技术方案如下：

本发明的第一方面，提供一种用于检测对硝基酚的试纸条，其中，包括试纸基体，设置在所述试纸基体上的E.coli BL21菌株，所述E.coli BL21菌株携带有pPNP-LacZ质粒，所述pPNP-LacZ质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述pPNP-LacZ质粒的物理图谱如图1所示。

可选地，所述用于检测对硝基酚的试纸条还包括设置在所述试纸基体上的β-半乳糖苷酶显色底物。

可选地，所述β-半乳糖苷酶显色底物选自5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷。

可选地，所述试纸基体为长方形，沿所述试纸基体的长度方向上，所述携带有pPNP-LacZ质粒的E.coli BL21菌株和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷设置在所述试纸基体的1/8～1/2处。

可选地，沿所述试纸基体的长度方向上，所述携带有pPNP-LacZ质粒的E.coliBL21菌株和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷设置在所述试纸基体的1/4处。

可选地，所述试纸基体选自滤纸。

本发明的第二方面，提供一种本发明如上所述的用于检测对硝基酚的试纸条的制备方法，其中，包括步骤：

利用引物聚合酶链反应，从pPNP-mrfp质粒上克隆pPNP基因片段的基因序列，从pCU19质粒上克隆LacZ报告基因片段的基因序列，所述pPNP-mrfp质粒的核苷酸序列如SEQID NO：2所示；