[发明专利]一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用

说明书

本发明公开了一种胡子鲇性别特异性分子标记引物，该引物为引物NP544，引物NP544包括正向引物NP544‑F和反向引物NP544‑R，碱基序列分别如SEQ ID NO：1所示和SEQ ID NO：2所示。还公开了用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒和方法，及上述引物或试剂盒和方法在鉴定胡子鲇性别方面的应用。该引物特异性好，准确性高，对胡子鲇活体没有伤害，可一次性快速准确批量鉴定胡子鲇的性别，具有重要的科研和应用价值。

技术领域

本发明属于胡子鲇性别鉴定技术，具体涉及一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用。

背景技术

胡子鲇(Clariasfuscus)，又称塘虱鱼，隶属鲇形目、胡子鲇科、胡子鲇属。该物种肉质细嫩，味道鲜美，经济价值高，是我国南方大面积养殖的淡水鱼类。胡子鲇具有特殊的附属呼吸器官，可适应极低溶氧环境，为广温性鲇科鱼类，具有抗病能力强、养殖简单、周期短、产量高、成本低和容易运输等特点，目前在广西、广东和福建等地形成规模化养殖产业，成为具有较好发展前途的淡水养殖品种。胡子鲇属雄性异配XX/XY性别决定类型，具有明显的雌雄生长差异，在同等养殖条件下，雄鱼生长速度远远高于同龄雌鱼。当养殖胡子鲇达到上市规格时，雌性胡子鲇正处于性腺发育阶段，腹部膨大，其性腺指数远高于雄性，导致雌鱼比同等规格的雄鱼价格低4元/公斤左右。因此，进行全雄胡子鲇品种研究可以大大节约养殖成本、提高商品鱼质量和经济效益。然而，胡子鲇雌雄个体在胚胎和幼鱼阶段无法通过形态学鉴定性别，这给开展胡子鲇性腺分化研究和单性苗种培育带来很大的困难，也极大地限制了该物种产业的发展。迄今为止，国内外尚无能够成功鉴定胡子鲇遗传性别的分子标记的报道。因此，开发一种准确鉴定遗传性别的分子标记在胡子鲇单性育种中具有极大的生产应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及包括该引物的试剂盒。

本发明第二个目的在于提供一种胡子鲇性别鉴定方法。

本发明的最后一个目的在于提供上述引物或上述试剂盒或上述方法在胡子鲇性别鉴定方面的应用。

本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种胡子鲇性别特异性分子标记引物，所述引物为引物NP544，所述引物NP544包括正向引物NP544-F和反向引物NP544-R，所述正向引物NP544-F的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物NP544-R的碱基序列如SEQ ID NO：2所示。

具体的，引物NP544的核苷酸序列如下：

正向引物NP544-F：5’-cacacataagctggataaacggagaca-3’；

反向引物NP544-R：5’-ttaaacccaagcccttgccaacaa-3’。

本发明还提供了一种用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒，该试剂盒包括上述胡子鲇特异性分子标记引物。

本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：一种胡子鲇性别鉴定方法，包括以下步骤：在雌雄个体的基因组DNA中采用PCR扩增出特异性片段，具体包括：合成上述引物，提取待测胡子鲇的基因组DNA，采用上述引物，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增，采用毛细管电泳检测扩增产物，根据测序峰型结果鉴定雌雄个体，其中杂合峰型为雄性个体，纯合峰型为雌性个体。

在上述胡子鲇性别鉴定方法中：

优选的，PCR扩增时采用的PCR反应体系包含30ng/μL DNA模板1.0μL，2×EasyPCR SuperMix 12.5μL，10mM正向引物NP544-F和反向引物NP544-R各0.5μL，ddH₂O 10.5μL，总共25μL。

优选的，PCR扩增时采用的PCR反应程序是：94℃预变性5min，94℃变性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环35次，72℃延伸10min。