[发明专利]一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法

权利要求书

1.一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)利用发根农杆菌诱导宿主植物产生毛状根；

(2)筛选幼嫩的毛状根进行除菌培养，获得无菌的毛状根；

(3)将无菌的毛状根用液体MSR培养基进行液体扩繁，获得液体扩繁的毛状根；

(4)取部分液体扩繁的毛状根置于固体MSR培养基上，接种丛枝菌根真菌孢子。

2.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：利用发根农杆菌诱导宿主植物产生毛状根的方法为：取宿主植物进行消毒，在无菌环境下将消毒后的宿主植物切开使切面形成愈伤组织，放置在共培养培养基上，将活化后的发根农杆菌菌液滴于愈伤组织中心处，在培养箱中暗培养后用无菌水冲洗去除残留的农杆菌，后转移到除菌培养基上培养除菌，每隔3天转移一次培养基，至愈伤组织上陆续产生毛状根为止。

3.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：筛选幼嫩的毛状根进行除菌培养，获得无菌的毛状根的方法为：当毛状根长至3±1cm时，筛选其中幼嫩，生长迅速的根，取根段至除菌培养基上，经过数代连续培养直至除菌完成，不产生菌斑为止，然后转移到不含抗生素和任何激素的MSR培养基上。

4.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：将无菌的毛状根用液体MSR培养基进行液体扩繁，获得液体扩繁的毛状根的方法为：将幼嫩的毛状根放入装有液体MSR培养基的三角瓶中，在恒温下培养，每隔30天更换一次液体MSR培养基。

5.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：取部分液体扩繁的毛状根置于固体MSR培养基上，接种丛枝菌根真菌孢子的方法包括：

将得到的毛状根放在固体MSR培养基上，待接种孢子；

将孢子湿筛、消毒后转移到水琼脂培养基上，在恒温培养箱内进行暗培养，将符合条件的孢子在体式显微镜下标注好位置，在无菌条件下将上述孢子转移到生长毛状根的固体MSR培养基中，在25℃的恒温培养箱内避光培养，使孢子延伸菌丝和毛状根形成共生，获得幼嫩孢子；

孢子的继代培养：在无菌条件下切出含有孢子的培养基，切碎混合均匀后涂抹在生长良好的且未接种孢子的含有毛状根的固体MSR培养基上进行继代培养。

6.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：所述宿主植物为去皮胡萝卜。

7.根据权利要求1所述的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，其特征在于：所述丛枝菌根真菌孢子具体为丛枝菌根真菌异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis，Ri)孢子。