[发明专利]一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法

说明书

本发明公开了一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，属于微生物培养领域，具体涉及一种诱导植物产生毛状根，利用液体培养基快速扩繁，与丛枝菌根真菌接种后提高丛枝菌根真菌生长速度，改善产孢质量和效率的方法；本发明将液体MSR培养基扩繁毛状根和接种丛枝菌根真菌技术相结合，大大提高了生产丛枝菌根真菌繁殖体的效率，简化了操作程序，降低了染菌风险；本发明还提供了完整的毛状根液体扩繁的方法流程，用以提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率，对于大批量的生产扩繁丛枝菌根真菌繁殖体以及菌剂生产有重要作用。

技术领域

本发明属于微生物培养领域，具体涉及一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法。

背景技术

丛枝菌根(AM)是广泛存在于自然界植物与真菌之间的共生体系，其在绝大多数陆生植物根系皮层内定殖并形成特殊的丛枝状结构，该共生体系可追溯到4亿年前，AM真菌在植物体吸收养分的同时能够促进植物对水分、矿物质和营养物质的吸收(Maillet et al.,2011)。

现有的丛枝菌根真菌毛状根离体双重培养体系的毛状根培养多是在固体培养基上继代，继代效率慢，根据毛状根的生长状况需定期更换培养基，增加了染菌风险，产孢效率和孢子质量不高，影响了该方法在丛枝菌根真菌菌剂生产上的规模化应用。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题，提供一种结构简单，设计合理的一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种提高丛枝菌根真菌产孢质量和效率的方法，包括以下步骤：

(1)利用发根农杆菌诱导宿主植物产生毛状根；

(2)筛选幼嫩的毛状根进行除菌培养，获得无菌的毛状根；

(3)将无菌的毛状根用液体MSR培养基进行液体扩繁，获得液体扩繁的毛状根；

(4)取部分液体扩繁的毛状根置于固体MSR培养基上，接种丛枝菌根真菌孢子。

作为本发明的进一步优化方案，利用发根农杆菌诱导宿主植物产生毛状根的方法为：取宿主植物进行消毒，在无菌环境下将消毒后的宿主植物切开使切面形成愈伤组织，放置在共培养培养基上，将活化后的发根农杆菌菌液滴于愈伤组织中心处，在培养箱中暗培养后用无菌水冲洗去除残留的农杆菌，后转移到除菌培养基上培养除菌，每隔3天转移一次培养基，至愈伤组织上陆续产生毛状根为止。

作为本发明的进一步优化方案，筛选幼嫩的毛状根进行除菌培养，获得无菌的毛状根的方法为：当毛状根长至3±1cm时，筛选其中幼嫩，生长迅速的根，取根段至除菌培养基上，经过数代连续培养直至除菌完成，不产生菌斑为止，然后转移到不含抗生素和任何激素的MSR培养基上。

作为本发明的进一步优化方案，将无菌的毛状根用液体MSR培养基进行液体扩繁，获得液体扩繁的毛状根的方法为：将幼嫩的毛状根放入装有液体MSR培养基的三角瓶中，在恒温下培养，每隔30天更换一次液体MSR培养基。

作为本发明的进一步优化方案，取部分液体扩繁的毛状根置于固体MSR培养基上，接种丛枝菌根真菌孢子的方法包括：

将得到的毛状根放在固体MSR培养基上，待接种孢子；

将孢子湿筛、消毒后转移到水琼脂培养基上，在恒温培养箱内进行暗培养，将符合条件的孢子在体式显微镜下标注好位置，在无菌条件下将上述孢子转移到生长毛状根的固体MSR培养基中，在25℃的恒温培养箱内避光培养，使孢子延伸菌丝和毛状根形成共生，获得幼嫩孢子；

孢子的继代培养：在无菌条件下切出含有孢子的培养基，切碎混合均匀后涂抹在生长良好的且未接种孢子的含有毛状根的固体MSR培养基上进行继代培养。

作为本发明的进一步优化方案，所述宿主植物为去皮胡萝卜。