[发明专利]抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体、制备方法及其应用

权利要求书

1.抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体为猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其特征在于，编码所述猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1或2所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

目的基因截选：对猪传染性胃肠炎病毒的NSP14蛋白进行亲水性、免疫原性及表面暴露性分析后，根据分析结果在所述nsp14基因序列中截选目的基因；

引物设计与合成：结合所述目的基因截选步骤的分析结果，根据NCBI数据库公布的猪传染性胃肠炎病毒nsp14基因序列进行引物设计与合成，获得引物1和引物2；

截短突变体构建：以所述引物1和引物2作为上下游引物，以猪传染性胃肠炎病毒nsp14基因序列为模板扩增所述目的基因，并构建含有所述目的基因的截短突变体pET-nsp14a；

截短突变体转化：将所述截短突变体pET-nsp14a转化至宿主菌中，依次经过平板涂布与培养、双酶切鉴定和测序后，确定目的基因是否插入成功；

目的蛋白诱导表达：将插入成功的宿主菌加入含IPTG的液体培养基中进行蛋白诱导表达；

目的蛋白纯化：蛋白诱导表达结束后，收集宿主菌菌体进行蛋白纯化，获得纯化后的NSP14a蛋白。

4.根据权利要求3所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述引物1和引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

5.根据权利要求3所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，在所述目的基因截选步骤中，通过对猪传染性胃肠炎病毒的NSP14蛋白进行亲水性、免疫原性以及表面暴露性分析后，确定了NSP14蛋白的第201-460位氨基酸序列亲水性、免疫原性及表面暴露性符合预期，因此，以编码该氨基酸序列的核苷酸序列作为目的基因。

6.根据权利要求5所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，构建所述截短突变体pET-nsp14a所用的载体为pET-28a(+)。

7.根据权利要求3所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，在所述目的蛋白诱导表达步骤中，诱导表达条件为16-37℃，6-8h，IPTG的工作浓度为0.2-1.0mmol/L，所述目的蛋白纯化采用包涵体蛋白变性、透析浓缩及切胶回收相结合的方式进行。

8.根据权利要求3所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括纯化后的NSP14a蛋白进行血清抗体效价检测、特异性检测、免疫荧光检测、亚类鉴定以及抗原表位鉴定试验。

9.根据权利要求1或2所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体在抗猪传染性胃肠炎中的应用。

10.根据权利要求1或2所述的抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体在制备抗猪传染性胃肠炎制剂或药物中的应用。