[发明专利]抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体、制备方法及其应用

说明书

本发明提出一种抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体、制备方法及其应用，属于基因工程领域，能够解决现有技术中缺乏TGEVNSP14蛋白的单克隆抗体的技术问题。其中，抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体为猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，编码猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；该抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体通过以下方法制备得到：目的基因截选、引物设计与合成、截短突变体构建、截短突变体宿主菌转化及目的蛋白诱导表达与纯化等。本发明能够应用于抗猪传染性胃肠炎以及制备抗猪传染性胃肠炎制剂或药物方面。

技术领域

本发明属于基因工程领域，尤其涉及一种抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体、制备方法及其应用。

背景技术

猪传染性胃肠炎(Swine transmissible gastroenteritis，TGE)是一种由猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)引起的急性肠道传染病。该疾病的临床表现为严重呕吐、腹泻等，具有发病率和死亡率高的特点，对10日龄以内的仔猪的致死率高达100％。在世界多地流行，给养猪业带来巨大经济损失。

由于冠状病毒中的非结构蛋白14(Non-structural protein 14，NSP14)具有较高的保守性。已有研究表明SARS冠状病毒(SARS-CoV)和鼠肝炎冠状病毒(MHV)的NSP14蛋白具有3'-5'核酸外切酶(Exonuclease，ExoN)活性和N7-甲基转移酶(N7-methyltransferase，N7-MTase)功能，且在病毒的复制、转录和翻译过程中发挥着重要作用，有望成为治疗该病毒病的药物新靶点。目前，国内外均有关于抗TGEV S蛋白、M蛋白和N蛋白单克隆抗体的研究，还有关于抗TGEV NSP5蛋白和NSP8蛋白单克隆抗体的报道，但是针对TGEV NSP14蛋白的单克隆抗体及以抗体为基础的TGE早期诊断方法还未见报道。

因此，本发明提出一种制备抗TGEV NSP14蛋白单克隆抗体及其制备方法以填补现有技术的空白。

发明内容

本发明针对现有技术中缺乏TGEV NSP14蛋白的单克隆抗体的技术问题，提出一种抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体、制备方法及其应用，具有制备工艺简单、可操作性强、治疗效果显著等特点，填补了现有技术在TGEVNSP14蛋白的单克隆抗体及其后续应用上的空白。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，所述抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体为猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

在一实施方式中，编码猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了一种抗猪传染性胃肠炎病毒NSP14蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

引物设计与合成：根据NCBI数据库公布的猪传染性胃肠炎病毒nsp14基因序列进行引物设计与合成，获得引物1和引物2；

目的基因截选：对猪传染性胃肠炎病毒的NSP14蛋白进行亲水性、免疫原性及表面暴露性分析，根据分析结果在nsp14基因序列中截选目的基因；

截短突变体构建：以引物1和引物2为上下游引物，以猪传染性胃肠炎病毒nsp14基因序列为模板扩增所述目的基因，并构建含有目的基因的截短突变体pET-nsp14a；

截短突变体转化：将截短突变体pET-nsp14a转化至宿主菌中，依次经过平板涂布与培养、双酶切鉴定和测序后，确定目的基因是否插入成功；