[发明专利]附子的多元统计分析方法

权利要求书

1.一种附子的多元统计分析方法，其特征在于，所述多元统计分析方法包括以下步骤：

1)利用高效液相色谱检测附子制品及煻灰炮附子，并分别获得附子制品及煻灰炮附子中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱共6种乌头碱类生物碱含量；

利用高效液相色谱串联质谱联用检测附子制品及煻灰炮附子，获得相应的化学色谱峰峰面积，并确认煻灰炮附子所得化学色谱峰对应的活性成分；

所述高效液相色谱串联质谱联用检测中附子制品及煻灰炮附子需制备相应的附子供试品溶液；

所述附子供试品溶液是取附子制品/煻灰炮附子加入氨水溶液，再加入体积比为1:1的异丙醇-乙酸乙酯混合溶液，经超声提取、定容、过滤，所得续滤液经浓缩后，再次加入体积比为1:1的异丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，过滤制得；

所述高效液相色谱串联质谱联用检测中色谱条件为：

流动相A为采用浓度为0.04mol/L的乙酸铵溶液，流动相B为乙腈；

所述乙酸铵溶液为氨水调节pH值至10的乙酸铵溶液；

采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱条件为：

0～10min，95％→90％流动相A，5％→10％流动相B；

10～25min，90％→60％流动相A，10％→40％流动相B；

25～50min，60％→48％流动相A，40％→52％流动相B；

50～80min，48％→30％流动相A，52％→70％流动相B；

80～95min，30％→15％流动相A，70％→85％流动相B；

所述高效液相色谱串联质谱联用检测中色谱柱为Phenomenex Gemini C18色谱柱、柱温为40℃、流速为1.0mL/min、检测波长为240nm；

从煻灰炮附子所得的18个化学色谱峰中选取14个峰面积较大的分析色谱峰作为分析对象；选取过程中，排除33号化学色谱峰，原因是33号色谱峰虽然具有最高的峰面积，但在HPLC-IT-TOF-MSⁿ液质分析中未得到任何母离子和碎片离子信息；

2)将测得的附子制品和煻灰炮附子中6种乌头碱类生物碱含量、检测附子制品和煻灰炮附子获得的14个分析色谱峰的峰面积作为数据一并进行主成分分析、偏最小二乘-判别分析和聚类分析，获得分析结果。

2.根据权利要求1所述的附子的多元统计分析方法，其特征在于，主成分分析、偏最小二乘-判别分析和聚类分析采用软件Metaboanalyst 4.0进行分析；

聚类分析方法为系统聚类法。

3.根据权利要求1或2所述的附子的多元统计分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱联用检测中附子制品及煻灰炮附子需制备相应的附子供试品溶液；

所述附子供试品溶液是取4重量份附子制品/煻灰炮附子加入3体积份浓度为10wt％的氨水溶液，再加入50体积份体积比为1:1的异丙醇-乙酸乙酯混合溶液，经超声提取、定容、过滤，再取40体积份所得续滤液浓缩后，再次加入1体积份体积比为1:1的异丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，过滤制得；

其中，重量份与体积份之间的对应关系为g：mL。

4.根据权利要求1或2所述的附子的多元统计分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱联用检测中的质谱分析采用ESI离子源，在正负离子模式下进行检测。

5.根据权利要求4所述的附子的多元统计分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱联用检测中的质谱条件为：

第一个质量分析器的检测范围为100～1000质荷比，离子积累时间设定为30ms；

第二个质量分析器的检测范围为50～1000质荷比，离子积累时间设定为20ms；

第三个质量分析器的检测范围为50～1000质荷比，离子积累时间设定为20ms。

6.根据权利要求4所述的附子的多元统计分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱联用检测中的质谱条件为：

氮气流速为1.5L/min，CDL温度为200℃，加热块的温度为200℃，PDA的检测波长范围为200～700nm，正离子模式下接口电压为4.5kV，负离子模式下接口电压为3.5kV，正负离子模式的检测电压均为1.7kV，干燥气压设定为100kPa，最大压力设定为30MPa。