[发明专利]附子的多元统计分析方法

说明书

本发明提供一种附子的多元统计分析方法，属于药物检测技术领域，所述附子的多元统计分析方法是分别利用高效液相色谱和高效液相色谱串联质谱联用检测附子制品及煻灰炮附子，并分别获得附子制品及煻灰炮附子中6种乌头碱类生物碱含量和相应的化学色谱峰峰面积，从化学色谱峰中选取14个分析色谱峰，将14个分析色谱峰的峰面积和6种乌头碱类生物碱含量作为数据一并进行主成分分析、偏最小二乘‑判别分析和聚类分析，获得分析结果。本发明采用多元统计分析方法对不同附子制品的化学成分进行了研究和比较，为煻灰炮附子在经典名方中的应用提供理论依据和数据支持。

技术领域

本发明涉及药物检测技术，尤其涉及一种附子的多元统计分析方法。

背景技术

附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的子根的加工品，主要功效为回阳救逆，补火助阳，散寒止痛。附子中的二萜生物碱还具有明显的降压、抑制心肌缩力和抗心律失常作用，而与其水溶性成分则具有升压、强心作用，附子中的双酯型二萜生物碱则能够改善心律失常。

附子作为重要的常用中药，在真武汤、附子汤、桂枝芍药知母汤、温脾汤和小续命汤等经典名方中均有使用，因其具有明显的毒性和疗效，常需炮制加工后使用。而炮制加工方法的改变也势必会影响不同附子加工品的药理活性和安全性。

煻灰炮附子在古代(尤其是唐朝之前)已经过长期临床使用，表明在炮制加工得当、规范煎煮的前提下，煻灰炮附子的安全性和药理活性得到了很大认可。鉴于煻灰炮附子在经典名方中的广泛使用及其古今炮制加工的差异，以煻灰炮附子中所含化学成分的研究并分析，对建立使用了煻灰炮附子的经典名方的质量标准至关重要。此外，由于附子的煻灰古法炮制过程中，存在不易掌握火候的困难、附子加工时易出现烤焦或者烤制时间不足的问题，也容易造成加工药材的浪费，对煻灰炮附子的化学成分进行研究并分析，为寻找能够代替古法煻灰炮附子的现代加工附子制品提供科学依据。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种附子的多元统计分析方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种附子的多元统计分析方法，所述多元统计分析方法包括以下步骤：

1)利用高效液相色谱检测附子制品及煻灰炮附子，并分别获得附子制品及煻灰炮附子中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱共6种乌头碱类生物碱含量；

利用高效液相色谱串联质谱联用检测附子制品及煻灰炮附子，获得相应的化学色谱峰峰面积，并确认煻灰炮附子所得化学色谱峰对应的活性成分；

从煻灰炮附子所得的18个化学色谱峰中选取14个峰面积较大的分析色谱峰(主要色谱峰)作为分析对象；选取过程中，排除33号化学色谱峰，原因是33号色谱峰虽然具有最高的峰面积，但在HPLC-IT-TOF-MSn液质分析中未得到任何母离子和碎片离子信息；

2)将测得的附子制品和煻灰炮附子中6种乌头碱类生物碱含量、检测附子制品和煻灰炮附子获得的14个分析色谱峰的峰面积作为数据一并进行主成分分析(PCA)、偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)和聚类分析(CA)，获得分析结果。

进一步的，主成分分析(PCA)、偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)和聚类分析(CA)采用软件Metaboanalyst4.0进行分析；聚类分析方法为系统聚类法(HierarchicalClustering)。

进一步的，所述高效液相色谱串联质谱联用检测中附子制品及煻灰炮附子需制备相应的附子供试品溶液；

所述附子供试品溶液是取附子制品/煻灰炮附子加入氨水溶液，再加入体积比为1∶1的异丙醇-乙酸乙酯混合溶液，经超声提取、定容、过滤，所得续滤液经浓缩后，再次加入体积比为1∶1的异丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，过滤制得。