[发明专利]一种检测ctDNA的恒温无酶系统的构建及其应用

权利要求书

1.一种ctDNA检测探针组，其特征在于，所述ctDNA检测探针组包括发夹序列组和报告序列组；

所述发夹序列组包括发夹序列H₁和发夹序列H₂；

所述发夹序列H₁包括序列A，序列B，序列C和序列D；

所述序列A和序列B靶向结合目标ctDNA；

所述发夹序列H₂包括序列E和序列F；所述序列E与所述序列B和序列C互补配对，且序列C的碱基数大于序列A的碱基数；

所述发夹序列H₁和发夹序列H₂在目标ctDNA的引发下，相互杂交形成稳定的双链DNA复合物；

所述报告序列组包括Reporter-F和Reporter-Q；

所述Reporter-F与Reporter-Q互补配对；

所述Reporter-F与所述序列D互补配对，且配对碱基数大于与Reporter-Q的配对碱基数。

2.根据权利要求1所述的ctDNA检测探针组，其特征在于，所述ctDNA为乳腺癌ctDNA。

3.根据权利要求2所述的ctDNA检测探针组，其特征在于，所述ctDNA的核苷酸序列为：5’-CTCAGTGATTTTAGAGAGAGGAT-3’。

4.根据权利要求1所述的ctDNA检测探针组，其特征在于，

所述发夹序列H₁的核苷酸序列为：5’-ATCCTCTCTCTAAAATCACTGAGCCATGTGTAGACTCAGTGATTTTAGACCTTGTCATAGAGCAC-3’；

所述发夹序列H₂的核苷酸序列为：5’-TCACTGAGTCTACACATGGCTCAGTGATTTTAGACCATGTGTAGA-3’；

所述Reporter-F的核苷酸序列为：5’-CGAGTGCTCTATGACAAGGTCTAAAA-3’；

所述Reporter-Q的核苷酸序列为：5’-CCTTGTCATAGAGCACTCG-3’。

5.根据权利要求1所述的ctDNA检测探针组，其特征在于，所述Reporter-F与Reporter-Q中的一条连接有荧光基团，另一条连接有淬灭基团。

6.一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂中含有权利要求1～5中任一项所述的ctDNA检测探针组。

7.权利要求1～5中任一项所述的ctDNA检测探针组在制备ctDNA检测产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测试剂、检测试剂盒、检测芯片。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述ctDNA检测产品的使用方法为：

(1)分别将权利要求1～5中的发夹序列H₁、发夹序列H₂和报告序列组退火，获得具有折叠结构的发夹序列H₁和H₂、以及报告分子复合物；

(2)混合具有折叠结构的发夹序列H₁和H₂、以及报告分子复合物，加入检测样品，37±1℃下反应至少35min，对比反应前后的荧光强度变化，判断检测样品中是否含有目标ctDNA。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(2)中的判断标准为：

(1)若反应前后的荧光强度无显著差异，则检测样品中不含目标ctDNA；

(2)若反应前后的荧光强度存在显著差异，则检测样品中含有目标ctDNA。